四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37表达细胞系的建立.PDF

北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ） X2U0+,R 2/ !8‘6+4 U+6a80Y61b（8,R1 YK68+K8Y ）$ a@5P #$ +@P S$ *H)P :- ·-#- · ·论著 · 四环素调控型猪鼻支原体蛋白!# 表达 细胞系的建立 龚曼曼，孟$ 麟，刘文斌，张建芝，寿成超 （北京大学临床肿瘤学院，北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室 ，北京$ %’ ） ［摘$ 要］目的：建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白!# 的表达细胞系，为研究!# 对细胞表型的影响及相关机制 奠定基础。方法：构建()*+,-. /01. 123(# 重组质粒，酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体(24’’ 共转染/5(3673130893:; 细胞，用=?@A=)B7 和C5DEFB)BGB7 双药筛选出阳性克隆，分别提取细胞总0+, 和总蛋白， 应用反转录3聚合酶链反应（?HIH?EH F?D7E)?B(FDEH (@5=AH?DEH )JDB7 ?HD)FB@7 ，013!K0 ）和LHEFH?7 印迹对其表达进行鉴 定，并确定四环素诱导的最适时间和浓度。通过噻唑蓝（AHFJ=5 FJBDM@5=5 FHF?DM@5BNA ，O11 ）检测!# 对细胞增殖的影 响。结果：转染()*+,-. /01. 123(# 的/5(3673130893:; 细胞克隆能成功表达!# 蛋白（相对分子质量为’P - Q % ），且能将该蛋白分泌至胞外。四环素对其表达显示出明显的调控作用，不加四环素的细胞不表达!# 蛋白。 四环素质量浓度在: A. R 并作用S J 其表达水平即可达到最高峰。!# 的表达对细胞增殖具有一定的促进作 用。结论：已建立受四环素调控的!# 高效表达细胞系，为进一步研究!# 的功能和作用机制提供了实验细胞模 型。 ［关键词］四环素；支原体属；癌基因蛋白质I3A@E ；细胞系 ［中图分类号］ 0#3$ $ ［文献标识码］,$ $ ［文章编号］%S# %3%S#T（:- ）S3-#-3’ !#$%’()*+# ,- $ #$%* $+. /*01$%* 234 5* ’+* *67/*’+0 )85,7$)$ (8,/(’+’ 7/,#*’+ 94: 42+4 OD73AD7 ，O8+4 RB7 ，R6U LH73VB7 ，W,+4 XBD73MJB ，Y2U KJH73)JD@ （*H(D?FAH7F @Z CB@)JHABEF?= D7G O@5H)N5D? CB@5@= ，!H[B7 U7BIH?EBF= Y)J@@5 @Z 27)@5@= ，!H[B7 U7BIH?EBF= KH7F?H Z@? KD7)H? 0HEHD?)J ，CHB\B7 %’ ，KJB7D ） ;=?;@$ A%B*5#’C* ：1@ HEFDV5BEJ D EFDV5H )H55 5B7H ，]JB)J )D7 H9(?HEE !# (?@FHB7 @Z A=)@(5DEAD J=@?JB7BE D7G VH ?HN5DFHG V= FHF?D)=)5B7H ，Z@? B7IHEFBDFB7 FJH HZZH)F @Z !# @7 (JH7@F=(H @Z )H55E D7G BFE AH)JD7BEAP D*#(,. ：0H)@AVB7D7F (5DEABG !)*+,-. /01. 123(# ]DE )@7EF?N)FHG D7G )@F?D7EZH)FHG ]BFJ (24’’ B7F@ /5(3673130893:; )H55E V= 5B(@ZH)FDAB7HP !@EBFBIH )5@7HE ]H?H E)?HH7HG ]BFJ =?@A=3 )B7 D7G C5DEFB)BGB7P 013!K0 D7G LHEFH?7 V5@F ]H?H NEHG F@ H9DA FJH A0+, D7G (?@FHB7 H9(?HEEB@7 B7 EH5H)FHG )5@7HEP 1JH H9(?HEEB@7 5HIH5 DF GBZZH?H7F B7GN)B7