用铬黑T作为共振光散射探针测定蛋白质.PDF

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 6 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2002 年 6 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 732～735 用铬黑 T 作为共振光散射探针测定蛋白质 李树伟 　李　娜　赵凤林 　李克安 (北京大学化学与分子工程学院 ,北京 100871) ( ) 摘　要 　研究了金属指示剂铬黑 T EBT 作为共振光散射探针测定蛋白质的分析方法。实验表明 ,在 pH = 410 的BrittonRobinson 缓冲溶液条件下 ,铬黑 T 只有极弱的光散射 ,它与蛋白质结合后有强烈的共振光散射 λ 作用。在 = 375 nm 处 ,光散射强度最大 ,光散射强度与蛋白质的浓度成正比。据此建立了一种测定蛋白质 的新方法。该方法简便、快速、灵敏度高 ,对 HSA 的检出限达到39 μ g/ L ;线性范围为 0～15 mg/ L , 用于人体血 ( ) γ 清样品的分析并同考马斯亮蓝法比较 ,取得了令人满意的结果。同时亦研究了牛血清白蛋白 BSA 、球蛋 白、鸡蛋白蛋白、溶菌酶与染料EBT 之间的作用。比较了2 种不同类型的荧光仪器绘制的共振光散射光谱 ,并 探讨了共振光散射的机理。 关键词 　共振光散射 , 蛋白质 , 铬黑 T 1 　引　　言 随着人类基因组计划的提前完成 ,生物分析技术进入了后基因组时代。DNA 、RNA 、蛋白质和其他 生物大分子的检测技术发展十分迅速 ,新的方法和仪器不断取得进展 ,成为生命科学的前沿领域1 。有 ( ) 机染料在生物大分子表面组装和聚集所导致的共振光散射 resonance light scattering ,简称 RLS 已经成为 生物分析技术的一个重要组成部分 ,近几年来在蛋白质、核酸、糖原分析等诸多方面得到了日益广泛的 应用 , 对生物分析技术的发展有着重要的意义2 ～5 。共振光散射作为一种新的分子光谱技术 ,方法简 便 ,灵敏度高 ,可用普通的荧光分光光度计测量 ,因此该方法发展十分迅速 ,应用领域已经扩展到纳米粒 径分析、无机离子分析等诸多方面6 ,7 。进一步研究新的 RLS 体系 ,寻找性能更好的 RLS 有机染料探 针 ,扩展 RLS 的应用领域无疑是分析科学的一项重要任务。 ( ) 铬黑 T EBT 是一种重要的金属指示剂 ,在络合滴定中被广泛应用。铬黑 T 在酸性条件下本身呈红 色 ,与蛋白质结合后没有颜色的变化 ,但产生强烈的共振光散射作用。使用 RF540 荧光分光光度计的 λ 测定结果表明 ,在 = 375 nm 处 ,共振光散射强度最大 ,据此设计了测定蛋白质的方法。应用此法对人 血清实际样品进