斑点叉尾鮰鱼肠蛋白酶的分离纯化及其酶学性质.pdfVIP

第27卷第1期 大连海洋大学学报 V01．27No．1 201 2年2月 JOURNALOFDALIAN0CEANUNIVERSITY Feb．2012 斑点叉尾细鱼肠蛋白酶的分离纯化 及其酶学性质 黄丽洋，丁建君，姜山，杨杰，陈炜，胡建恩 (大连海洋大学食品科学与工程学院，辽宁大连116023) 摘要：以斑点叉尾鲴Ictaluruspunctatus鱼肠道为原料提取蛋白酶，对分离条件进行了优化，并对部分酶学 性质进行了研究。结果表明：鱼肠内的蛋白酶在硫酸铵饱和度为70％时，所得沉淀中酶活力最高。经过阴 离子交换层析分离后，蛋白酶的纯化倍数达到了2t8倍。该蛋白酶的最适温度为55℃，最适pH为7．5， g／L。K+和ca2+离子对该蛋白酶活性有较弱的激活 具有良好的低温稳定性和酸碱稳定性，米氏常数为5．4 抑制蛋白酶活性。 关键词：斑点又尾鲴；鱼肠；蛋白酶；分离纯化 中图分类号：Q959．482 文献标志码：A 斑点叉尾鲴lctalurus L)缓冲液，用高速组织捣碎机捣碎，在4℃下离 punctatus原产于美国密西 min，取上清液，按体积比为1 西比河，其肉质鲜美，现已成为中国淡水养殖种类 心(14000xg)20 之一¨1和大宗出口加工鱼类之一。而加工过程中 ：4加入正丙醇(4℃)，搅拌均匀后于4qC下静置 产生的鱼肚是高档食材，却作为废弃物处理，造成 4h，离心(14 min，收集上清液即为 000xg)20 了环境的污染。动物性蛋白酶由于受原料限制，一 粗酶液。 直产量低、价格高。为此，本研究中，作者以斑点 1．2．2硫酸铵的分级沉淀取粗酶液，加入硫酸 叉尾鲴的肠道为原料提取蛋白酶，对分离条件进行 铵使其饱和度分别为20％、30％、40％、50％、 了优化，并对部分酶学性质进行了研究，旨在将废 60％、70％和80％，搅拌均匀后在4℃下静置30 弃的鱼加工副产物作为生物制剂的原料。 min，离心(14000xg)20min，去上清液得沉淀， h 1材料与方法 溶解后测定不同饱和度下的蛋白酶活性，透析24 后保存备用¨1。 1．1材料 1．2．3蛋白酶的分离纯化经70％硫酸铵沉淀以 及透析后的粗酶液，用DEAE。，。一M阴离子交换柱 新鲜的斑点叉尾鲴鱼肠由江苏盐城海天水产品 有限公司提供，预处理前在一20℃下保存备用。主 分离，以去离子水和NaCI溶液(1mol／L)进行连 续梯度洗脱，流速为0．5mL／min，5mL／管，紫外 要试剂有酪蛋白、牛血清蛋白、L一酪氨酸等，均 检测波长为280nm，透析脱盐后测定蛋白酶活性， 为分析纯。主要仪器有ToyopearlDEAE650—M阴离 收集活性峰溶液。 子交换树脂、高速冷冻离心机、冷冻干燥机、紫外