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实验室自动化 高内涵方法 及细胞成像 在毒性评估中的应用 ——将Cellomics平台延伸到彗星分析和斑马鱼毒性研究 原文：Mark A. Collins, Ph.D 翻译：余长缨 评估样本毒性对人体健康的危害是贯穿整个生命科学的重要环节。这项评估在药物研发过程中显得 尤为重要，很多的药物由于存在着肝脏毒性或者心血管方面的毒性而被摒弃。在环境学、产品安全，尤其是 食品安全方面，毒性检测更是必不可少。 现在越来越多的法规要求减少进行毒性检测的动物数量，特别是非药物产品的毒性检测，例如欧盟 的《关于化学物品登记、评估和批核办法》简称 REACH 。对于目前毒性检测的大量需求和现有体外检测的 低检测率以及使用人工方法过于主观的矛盾，势必需要一种革新，以得到更好、更有效和更有预期性的毒 性检测手段和方法。 基于自动图像分析的高内涵方法能够产生关于每个细胞大小、形状、结构和强度等的海量信息。由于 大量样本的平均作用，大大增加了数据完整性。由于每个细胞都是独立个体被检测，因此其在生理学上的 细微变化也能够检测和精确定量。此外，高内涵方法也可以针对一些未知的靶标进行分析，尤其是对于使 细胞发生形态学变化的因素。 彗星分析 尾部长度，尾部延伸程度，以及尾部 DNA 的含 彗星分析（Comet assay），更加准确叫法 量比例等。 是单细胞凝胶电泳，是一种检测单细胞 DNA 在没有进行动物实验前，彗星分析被视为 损伤敏感性很高的技术。它将处理后的细胞包 体外评价化合物基因毒性和细胞毒性实验可靠 埋在显微镜载玻片上的薄层琼脂中，在中性或 性和有效性的关键（如 REACH）。 碱性条件下，DNA 会发生解聚。将该样品置于 Cellomics 的彗星分析生物应用能做彗星 电泳环境中，解聚的 DNA 片段和损伤的 DNA -FISH 检测分析，因此可用于确定基因序列、基 会从细胞核中游离出来。经过染色后，获得的图 因特异性损伤和修复，还可能用于疾病诊断。 片像是具有明显的头部和尾部的彗星，因此称 对彗星分析的关注表明了创新需求的一个 此方法为彗星分析（如图 1）。通过软件可以测 方面，就是使得枯燥乏味的人工检测变成全自 定该彗星状样品的头部和尾部的荧光含量，而 动，并且使所得数据更加稳健。毒性评价的新模 尾部的长度与 DNA 损伤有直接的关系，从而 型还在不断发展，但是高内涵仍将发挥其重要 进行基因毒性的定量分析。 作用。 彗星分析方法已经被一些监察机构所采 纳，而且更广泛的运用于基因毒性筛选和工业 化学、药品、生物杀虫剂、化妆品以及生态毒性 等的监察测试。 目前也有动向将体内的彗星分析来替代一 些传统的方法，如肝脏 UDS 检测。这使得该方 法现在变得越来越流行。但它也存在一些局限 性，如人工计数的通量不够，以及人工方法过于 主观。因此自动化和可定量的方法将会大大克 服其局限，势必具有更广阔的应用。Thermo Scientific Cellomics 高内涵平台基于此，开发 了彗星分析的软件模块，使彗星分析更加快速 和智能。 高内涵方法进行彗星分析提供了一系列的 优点，例如速度、通量、可重复性、客观性。高内 涵彗星分析软件可以进行快速的彗星计数，避 免了枯燥的手工计数，同时软件还可以提供大 Figure 1. 20x image of CHO-K1 cells treated 量的客观测量，如类似橄榄型的尾部测定，分析 with 150 µM 9-aminoacridin 实验室产品部技术通讯 17 斑马鱼毒性分析 射光，非荧光标记）以及荧光标记的胚胎分析。 在过去的几