微小RNA-294靶向抑制髓系细胞触发受体-中华危重病急救医学.PDFVIP

中华危重病急救医学2014年9月第26卷第9期 ChinCritCareMed，September2014，Vol.26，No.9 ·661 · ·论著· 微小RNA-294靶向抑制髓系细胞触发受体-1 对脓毒症炎症因子的影响 刘奕君 曹殿青 莫桂熙 张良清 【摘要】 目的 探讨微小RNA-294（miR-294）靶向抑制髓系细胞触发受体-1（TREM-1）对脓毒症肿瘤 坏死因子-琢（TNF-琢 ）、白细胞介素-6（IL-6）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的影响。方法 利用生物信息学 预测miR-294可能靶向调控TREM-1基因。体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7，分成非炎症期和炎症期，每 期各分为细胞对照组（NC组）、NC拟似物（mimic）和抑制剂（inhibitor）转染组（NCm组、NCi组）、miR-294mimic 和inhibitor转染组（miR-294m组、miR-294i组）5组。用双荧光素酶报告基因系统进行功能验证。以TurboFectTM 小干扰RNA转染细胞48h（非炎症期）后，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞TREM-1mRNA表达； 以1mg/L内毒素处理6h后（炎症期）收集上清液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TNF-琢、IL-6、HMGB1 浓度；用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测TREM-1蛋白表达。结果 ①双荧光素酶报告基因系统证实 TREM-1是miR-294的靶点。②非炎症期：miR-294m组TREM-1mRNA表达（2-驻驻Ct）较NC组、NCm组明显降 低（0.673±0.049比1.000±0.003、0.915±0.039，t ＝2.184、t ＝5.421，均P＜0.001）；miR-294m组TREM-1蛋1 2 白表达（灰度值）为NCm组的（50.00±1.19）%（t＝41.586，P＜0.001）。③炎症期：miR-294m组TNF-琢（ng/L）较 t＝4.212，P＝0.010），IL-6（ng/L）较NC组、NCm组明显 NC组明显降低（1547.18±47.18比2702.11±327.20， t ＝4.382、P ＝0.015，t ＝5.451、P ＝0.021）；TREM-1 降低（505.28±33.33比837.66±69.43、918.72±119.39，1 1 2 2 蛋白表达（灰度值）为NCm组的（51.33±0.88）%（t＝63.368，P＜0.001）；各组HMGB1比较均无差异。结论 miR-294能靶向抑制TREM-1表达，减少内毒素诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌TNF-α和IL-6。 【关键词】髓系细胞触发受体-1；微小RNA； 转染； 脓毒症 Effects of microRNA -294 on inflammatory factor of sepsis by targeting triggering receptor expressed on myeloid cells -1 Liu Yijun ，Cao Dianqing ，Mo Guixi ，Zhang Liangqing. Department of Anesthesiology ，the Affiliated Hospital of Guangdong Medical College ，Zhanjiang 524001 ，Guangdong ，China Corresponding author ：Zhang Liangqing ，Email ：zhanglq1970@163.com 【Abstract 】 Objective ToinvestigatetheeffectsofmicroRNA-294（miR-294）ontumornecrosisfactor-α （TNF-α），interleukin-6（IL-6）andhighmo