ABC 转运蛋白基因 slnTI 和slnTII 与盐霉素生物合成的.PDFVIP

微生物学通报 Jan. 20, 2014, 41(1): 58−66 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130080 研究报告 ABC 转运蛋白基因slnTI 和slnTII 与盐霉素生物合成的 相关性 1,2 2 1* 2* 刘静 姜春艳 张部昌 白林泉 (1. 230601) (2. 200240) 摘 要【目的】slnTI 和slnTII 是盐霉素生物合成基因簇中可能的两个转运蛋白基因，根据生 物信息学的分析推测它们属于ABC 转运蛋白家族。其中，slnTI 编码ABC 转运蛋白的ATP 结 合亚基，slnTII 编码ABC 转运蛋白的跨膜亚基，推测它们可能与盐霉素的外排有关。通过slnTI 和 slnTII 的基因中断与超量表达研究它们对盐霉素生物合成产量和抗性的影响。【方法】利用 REDIRECT®技术，在盐霉素产生菌白色链霉菌 XM211 中分别构建了slnTI 和slnTII 的基因置 换突变株 LJ01 和 LJ02 ，并通过基因回补对突变株进行了验证。利用整合型表达载体pPM927 在白色链霉菌XM211 中对slnTI 和slnTII 进行串联超量表达。将slnTI 和slnTII 导入变铅青链 霉菌 1326 中进行异源表达，通过液体培养实验检测衍生菌株对盐霉素的抗性。【结果】相比出 发菌株XM211 ，突变株LJ01 中盐霉素的产量下降了27.2% ，LJ02 下降了45.4% ，LJ01 和LJ02 中结构基因slnA3 和调控基因slnR 的转录水平都有明显降低。超量表达菌株LJ03 中盐霉素的 产量提高了 14.6%，转录结果显示LJ03 中不仅slnTI 和slnTII 自身转录水平有大幅提高，而且 slnA3 和slnR 转录水平也显著升高。抗性检测结果表明，异源表达菌株变铅青链霉菌LJ04 对盐 霉素的抗性水平略有提高。【结论】slnTI 和slnTII 是与盐霉素生物合成和外排有关的ABC 转运 蛋白基因，但并不是白色链霉菌XM211 对盐霉素的主要抗性基因。 关键词盐霉素，ABC 转运蛋白，基因置换，超量表达，抗性 Involvement of ABC transporter genes slnTI and slnTII in salinomycin biosynthesis LIU Jing1,2 JIANG Chun-Yan2 ZHANG Bu-Chang 1* BAI Lin-Quan2* (1. School of Life Science, Anhui University, Hefei , Anhui 230601, China) (2. State Key Laboratory of Microbial Metabolism, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China) Abstract: [Objective] In the salinomycin biosynthetic gene cluster, slnTI and slnTII encode the ABC transporter ATP-binding subunit and trans-membrane subunit, respectively. We speculate that slnTI 基金项目：(No. *通讯