铅螯合物人工抗原的制备与鉴定.PDF

生物技术通报 ·研究报告 · B IO TECHN OLO G Y　BULL E T IN 2009年第 11期 铅螯合物人工抗原的制备与鉴定 刘功良1 王菊芳2 李志勇3 梁世中2 ( 1 2 仲恺农业工程学院轻工食品学院 ,广州 510225; 华南理工大学生物科学与工程学院 ,广州 510006; 3广东检验检疫技术中心 ,广州 510623) ( ) 　　摘 　要 : 　以双功能螯合剂异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸 ITCB E 螯合铅离子 ,制备得半抗原 PbITCB E,然后再分别与载 体蛋白 KLH 或 B SA 偶联制备得免疫原 PbITCB EKLH 与包被抗原 PbITCB EB SA , ITCB EB SA 。用二喹啉甲酸法测 3种抗原 的浓度 ,分析半抗原 、抗原与载体蛋白的紫外吸收光谱 ,利用 SD SPA GE对 3种抗原的分子量进行鉴定 ,用三硝基苯磺酸法检 ε 测 3种抗原中的赖氨酸残基的 NH 被半抗原替换的程度 ,用石墨炉原子分光吸收法检测抗原中铅的含量 。研究结果表明 , 2 免疫原与包被抗原制备成功 , PbITCB EKLH、PbITCB EB SA、ITCB EB SA 的浓度依次为 6. 47 ±0. 08 m g/m l, 6. 68 ±0. 06 m g/ m l, 5. 57 ±0. 05 m g/m l;抗原与载体蛋白的紫外吸收光谱的特征各不相同; SD SPA GE 的结果显示 3种抗原的分子量均不同于 ε 各自的载体蛋白;抗原中载体蛋白 氨基的替换程度依次为 1. 86 ±0. 74 % 、55. 53 ±1. 13% 、54. 19 ±1. 34 % ;铅的含量依次 μ μ μ 为 15. 64 ±0. 11 g/m l, 17. 33 ±0. 15 g/m l, 0 g/m l。 关键词 : 　铅 双功能螯合剂 抗原 制备 鉴定 Prepara tion and Iden tif ica tion of Artif ic ia l L ead An tigen 1 2 3 2 L iu Gongliang W ang Jufang L i Zh iyong L iang Sh izhong 1 ( Colleg e of L ig h t Industry and F ood, Z hongka i