木聚糖酶基因克隆表达与分泌及定点诱变研究进展.PDF

5生物工程进展6 2001,Vol. 21, No. 2 木聚糖酶基因克隆、表达与分泌及定点诱变研究进展* 刘相梅 祁 蒙 曲音波 ( 山东大学 生物技术国家重点实验室, 济南 250100) B21142, 、、、、 。, , , , 。 木聚糖酶[E1 是一类以内切方式水 含有深蓝色RBB2木聚糖(Rema ol Brilliant Bule2Xy2 解木聚糖分子中B21142糖苷键的酶, 其水解产物主 lan) 的选择平板上, 含有木聚糖酶基因的阳性克隆 要是木二糖和木寡糖。该酶具有广泛的应用前景。 子可分解该蓝色底物从而在菌落周围形成透明 [ 1] 利用木聚糖酶对含有半纤维素的纸浆进行预处理, 圈 ; 另一种方法基于刚果红能与有B21142糖苷键 可以减少漂白工艺中的有害化学品的用量, 从而减 连接的纤维性底物紧密结合染成红色, 糖苷键水解 轻环境污染; 而且可提高纸浆的漂白度, 降低纸张的 后这种红色又可以被氯化钠溶液脱去的原理, 将转 脆性, 使纸张不易返黄; 还可以作为饲料添加剂去除 化子点种或涂布在含有木聚糖的选择平板上生长过 戊聚糖类的抗营养因子, 提高饲料的利用率, 改善其 夜, 用 011% 刚果红染色30 分钟, 用 1molPL 氯化钠 营养价值; 用于面包加工可提高面包的松软度, 增大 溶液脱色20 分钟左右, 阳性克隆子的菌落周围形成 面包体积。很多细菌和真菌均可产生木聚糖酶, 有 透明圈( 背景是红色) , 若再用 1molPL 的盐酸处理, 些木聚糖酶已被分离纯化并对其进行了性质研究, 则背景染成深蓝色, 透明圈更明显并可保持较长时 [2] 木聚糖酶基因也已被克隆和表达, 各种来源和性质 间 。也有基于这两种方法把转化子培养在普通培 不同的木聚糖酶基因还在不断地被克隆出来, 并从 养基上生长过夜, 再倒上层选择培养基检出阳性克 [1] [3] 分子水平探索了木聚糖酶分子的结构和功能, 为构 隆子 。Bernier 等是用氯仿处理选择平板上生长 建高效表达菌株, 研究木聚糖酶的合成调控及木聚 过夜的菌落1 小时, 干燥表面 30 分钟, 再倒含有溶 糖的降解机制等奠定了基础。 菌酶的上层培养基培养16- 24 小时, 阳性克隆子释 放的酶分解木聚糖, 直接观察平板上浑浊的培养基 1 背景下菌落周围出现的透明圈。克隆的具有代表性 自七十年代末, 八十年代初开展木聚糖酶基因 的部分木聚糖酶基因总结于表1。 的研究工作以来, 已有上百种来自真菌和细菌的木 2 聚糖酶基因被克隆并在大肠杆菌中表达。一般都是 采用传统的方法: 提取染色体DNA, 用不同的限制 克隆的木聚糖酶基因一般使用自身所携带的启 性内切酶进行完全或部分酶切, 与质粒载体构建重 动子在受体菌中表达, 但是酶的表达水平比在原始 组质粒, 再以CaCl2 法制备感受态细胞或电转化法 菌株中下降了许多。原来能分泌到细胞外的酶也只 转化受体细胞大肠杆菌, 从转化子中筛选出阳性克 有少数在新的受体中能继续维持分泌性能, 与信号