核酸制备电泳仪操作规程.PDF

核酸制备电泳仪Sage Science Pippin 一、样品前处理准备 （1）样品处理：DNA 样品必须是去蛋白的，用TE 缓冲液或ddH2 O 溶解 （2 ）30ulDNA 样品+10ul 上样缓冲液，震荡离心，混合均匀 （3 ）确认DNA 片段大小及回收范围 （4 ）缓冲液要提前放到室温下，以免影响电流的连续性 二、仪器控制软件界面 （1）Main 主界面 ①泳道从下之上1-5 个，在Sample ID 填写每个泳道中加入样品的名称 ②Protocol Name 运行程序名称，可调用已编写好的运行程序 ③Progress 程序运行进度 ④Voltage 电压设置，默认值为1.2V ⑤Clock 系统日期和时间，可在System Options 界面进行更改和设置 ⑥“TEST ”按钮，将预制胶板放置在卡槽内，检查连续性 ⑦点击 “START”按钮，开始运行程序，点击“PAUSE ”按钮，暂时中止运行的程序 ⑧光学校正板放置在卡槽内，点击 “CALIBRATE ”按钮，进行光学矫正 ⑨点击“INFO ”，仪器信息及仪器使用说明书 ⑩点击 “SHUTDOWN”，关闭显示器及仪器 （2 ）Protocol Editor 程序编写界面 ①Cassette 设置，根据所使用的预制胶类型选择，本机配备的预制胶为2 ％ DF Marker V1 ②“Run time” ，运行时间设置 ③鼠标点击“Tight ”后，Target 框可进行手动填写，例如填写300bp 表示回收的DNA 片段为 300bp 左右， “Start”和 “End ”框自动出现数值，例如270bp ，330bp，表示回收的DNA 片 段范围270～330bp 。鼠标点击“Range ”框，“Start”和“End ”框可手动填写数值，表示回 收DNA 片段范围，Target 框自动出现数值。Sample ID Template 填写泳道加入样品的名称。 “Range Flag ”显示tight/narrow/broad 3 种，表示DNA 片段回收范围大小。 ④Reference lane 回收较大的DNA 片段（600bp 以上），需要选择1-5 任一个泳道作为参考泳 道，加入40µl Marker ，同时需要点击“APPLY REFERENCE TO ALL LANES ”按钮 1 ⑤回收较小片段时（100~600bp），Reference lane 设置为 off ，同时点击“USE INTERNAL STANDARDS”按钮，选择使用内标 ⑥ “NEW ”新建运行程序，“LOAD ”调用已编写好的程序 ⑦设置完成，点击“SAVE AS”按钮，给程序命名，将编写好的程序存储在指定的路径下， 以备下次调用 （3 ）Log Review 查看已运行程序信息 ①点击“LAST ”旁边的文件夹图标，选择需要查询程序的名称，点击“OK ”按钮，在Log Review 界面出现已运行程序信息 ②Log File 文件路径及名称，Instrument ID 仪器名称，Protocol Name 程序名称，Cassette Name 所使用的预制胶规格，Run time 运行时间，End Run when elution is completed 勾选上：洗脱完 成结束程序运行。Ref lane 参考泳道。Target/Start/End 分离DNA 片段范围信息。Range Flag 分离DNA 片段范围状态，波形图：泳道运行时间（X 轴）~光信号或泳道电流信号（Y 轴） （4 ）File manager 文件管理界面 ①点击 “Go To LOGS ”，查看以日期命名的文件下的文件 ②点击“Go To PROTOCOLS ”，查看已运行的文件 ③点击“Go To CASSETTES ”查看各种预制胶规格 （5 ）System Options 系统设置界面，可对仪器进行命名，对系统的日期和时间进行设置 三、编程 ①根据所需目的片段大小选择预制胶种类，例如，100-600bp 用2%agarose+V1 ②小片段 （100~600bp）选择内标internal standards ，不需要设置参考泳道；大片段选择外标 Marker ，需要设置一个参考泳道 ③设置回收方式和片段区域大小，设置运行时间，默认选择“洗提完成后终止” 。 四、光学校正CALIBRATE