微孔板荧光检测技术在化学及生物发光领域的应用.DOCVIP

微孔板化学发光法检测技术在生化领域的应用 美国Maxwell公司生物发光及化学发光仪简介 (研究级冷光仪LuminMax-C) 前 言 化学发光指化学反应过程中发射出来的光，又称冷光；生物发光是化学发光的一种，专指由酶催化的化学反应过程中发射出的光。化学和生物发光经常被用于测定样品中未知成分的量，并且在过去的十年里在基因表达和基因调控的研究中发挥着非常重要的作用。 通过发射光的比率可以推出未知成分的浓度，因此测定化学反应过程中的发射光是非常有用的。反应过程中产生的光与发射光的量产率是直接相关的，相应的，与发光物质的浓度成比例。因此，反应过程中的光可以相对反映出目标样品中发光物质的量。 近年来，生物发光和化学发光的研究及使用与日俱增。从测试细胞活性的ATP-荧光素酶检验，到当今的DNA、基因及蛋白质分析的应用日益扩大。与荧光发光不同，它不需要外部光源。冷光是从化学反应所产生的。利用光子计数检测器，通过对反应中所产生的光子计数，冷光检验已成为最灵敏的光学检测方法之一。美国Maxwell Sensors公司的LuminMax-C研究级化学发光仪（冷光仪）为广大用户提供了一款具有超高灵敏度和重复精度、易使用、结构紧凑及经济实用的仪器。该仪器可测量96孔微孔板（黑或白）中的发光强度。微孔板底部很清洁，因此，从孔的底部产生的发光即可被检测。（详细技术规格请咨询中国一级代理：南京覃思科技有限公司，TEL：02585432278或登录： HYPERLINK ） 优 点 ? 化学发光定量检测法相对于其它分析技术有许多优点：非常灵敏；动力学范围广；仪器设备便宜；这一新的发光实验方法的出现使得这一技术的应用非常广泛。LuminMax-C使用了超级光电倍增管作为检测器，它具有极高的灵敏度。检测灵敏度可达10-18 摩尔（HRP）以上。它具有检测从反应中产生光子数的能力，这意味着它可以检测样品中被分析物极小的份量（浓度）。 ? 优秀的灵敏度和低背景使发光检测仪从其它分析方法中脱颖而出。发光检测仪比吸收光谱仪灵敏 100,000 倍，比荧光仪至少灵敏 1,000 倍。 ? 在发光反应中，有两种成分的光能够到达检测仪。第一种与化学发光反应中的有限的反应物的浓度成比例。第二种也就是背景光，是基本不变的，与反应物中的塑料、杂质发出的磷光等有关。相对于分光光度计和荧光仪等其它检测技术，化学发光检测仪的背景光非常低。 ? 广泛的动力学范围和低仪器成本也是化学发光检测仪的优势。不需稀释样品或对样品细胞进行修饰，测量范围可以达到7个数量级以上的浓度。 ? 使用简单方便：具有用户友好界面的软件在随机奉送的光盘里，它非常容易安装。LuminMax-C不但体积小巧，而且通过简单的插入式连接（USB或者串口）与计算机相连，便于携带。当按下“GO”键，系统自动并快速地扫描所有选中的微孔，并且显示结果。计算结果以电子表格的形式显示。数据以光子数或相对光单元（RUL）作为报告被显示。 发光类型 ? 在某些反应中， 光产出的量随时间缓慢变化 。这些反应通常被称为持续反应 。检测前至少要先测定一个样品以确定最佳孵育时间。在持续发光反应中，实验步骤相对简单，加入反应物的时间以及反应物和样品的混合时间不像快速反应那么严格。 ? 快速反应：在合适的条件下会产生强烈的光的闪烁，在部分黑暗的反应室中可以看到。一些反应如发光蛋白的反应速度非常快。在快反应或闪烁反应中，反应物的混合必须在相对短的时间内完成，或者混合的程度必须能够在样品之间重复。 用 途 化学发光仪经常被用于： ·ATP（三磷酸腺甙）检验、荧光素酶检验 ·免疫及proteomics ·核酸，DNA及基因组 ·病毒研究（比如：SARS、禽流感病毒研究） ·临床诊断研究 ·染色体分析 ·毒性试验 ·细胞活力试验 ·餐馆卫生检测 ·环境检测 ·工业、农林业、畜牧业、养殖业等其它用途 最广泛的用途是对利用报告基因检测目标基因的表达以及检测细胞内 ATP 水平。 报告基因实验： 分子生物学家和细胞生物学家利用报告基因研究基因的表达和调控。将报告基因引入细胞 DNA 使之与某一特定分子事件相关，可以为这一分子事件带来可测性。通常检测的分子事件是基因功能，具有可测性的是发光。目前，市场上有许多发光报告基因出售。包括：萤火虫荧光素酶（ firefly luciferase ），β－半乳糖苷酶（ B -galactosidase ），β－葡萄糖苷酸酶（B -glucuronidase ， GUS ），碱性磷酸酶（ alkaline phosphatase ），和人生长激素（ human growth hormone ， hGH ）。 高灵敏度，低成本，快速以及使用简单使得发光检测仪