离子交换层析原理.PDF

苏州市海崴生物科技有限公司 Suzhou Haiwei Bioscience Co.,Ltd 离子交换层析原理 离子交换层析 （ion-exchange chromatography ，IEC ） 是利用离子交换剂为固定相，根据荷电溶质 与离子交换剂之间静电相互作用力的差别进行溶质分离的洗脱层析法。它是发展最早的层析技术之一， 也是目前蛋白质分离纯化中最常用的方法，大约占了 75％的比例。 离子交换层析具有许多的特点，包括： (1) 分辨率高，合适的离子交换介质对蛋白质等生物分子具有较高的选择性； (2) 料液处理量大，具有浓缩作用，可在较高流速下操作； (3) 应用范围广泛，优化操作条件后，可大幅度提高分离的选择性，所需柱长较短； (4) 产品回收率高； (5) 商品化的离子交换剂种类多，选择余地大，价格也远远低于亲和吸附剂； (6) IEC 的操作变量多，影响分离特性的因素复杂，虽然增加了优化的机遇，但也增加了放大的难 度。 离子交换层析技术已广泛于各学科领域。在生物化学及临床生化检验中主要用于分离氨基酸、多 肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。 1、离子交换层析原理 离子交换介质是由球形基质、表面阴离子或者阳离子功能基团以及与功能基团电荷相反的反离 子组成。基质和功能基团是固定不可移动的固定相，而各种反离子具有竞争关系。蛋白质等生物分子 本身具有一定的等电点，液相的 pH 与 pI 的差异必然引起生物分子表面电荷的改变，使其带负电荷或 者正电荷。因此生物分子与离子交换剂的相互作用首先取决于液相的 pH 值。由于各种分子的等电点 不同，而且蛋白质等表面一般是多价态的。因此同一 pH 下分子的带电情况不同，最后导致与离子交 换介质的作用力也不同，即生物分子的分配系数有差异。在盐离子存在的情况下，一方面蛋白质的分 配系数对离子强度非常敏感，离子强度的微小改变，就会引起分配系数的很大变化；另一方面，不同 地址：苏州市相城区阳澄湖镇东横港街9 号 TEL：0512 1 / 8 ADD ：No.9 Donghenggang Road Yangcheng lake Suzhou FAX：0512 Jiangsu P.R. China 苏州市海崴生物科技有限公司 Suzhou Haiwei Bioscience Co.,Ltd 蛋白质的分配系数变化可能相差很大，有时甚至达到几个数量级。离子交换层析就是利用 pH 值环境、 分子之间的分配系数差异以及离子强度的变化，最终达到生物分子之间的分离。如图 1 所示，以阴离 子交换为例，两种带负电荷的生物分子（pH 均大于 pI 值）在平衡状态下与交换剂相互作用，通过梯 度盐浓度洗脱，依次被洗脱下来而得到分离。 图 1 阴离子交换层析分离蛋白质示意图 不同的生物分子随 pH 的变化带电情况是不同的，因此选择不同的 pH 环境和不同类型的离子 交换剂，其分离结果最终是大相径庭的。如图 2 ，六种分离条件的选择只有其中两种可以将三组蛋白 质完全分开。一般来说，酸性条件下选择阳离子交换剂，而碱性条件下则需要选择阴离子交换剂。 地址：苏州市相城区阳澄湖镇东横港街9 号 TEL：0512 2 / 8 ADD ：No.9 Donghenggang Road Yangcheng lake Suzhou FAX：0512 Jiangsu P.R. China