克隆与酶学性质.PDF

Research Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 53 (6 ) :56 1 － 568 ; 4 June 20 13 ISSN 000 1 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn 芽胞杆 菌 (Bacillus sp． ) YX-1 耐有机 溶剂 葡萄糖 脱氢酶 的基因 克 隆与酶 学性质 1 ，2 1* 1 1* ， ， ， 张波涛 张荣珍 王磊 徐岩 1 ， ， 2 14 122 江 南 大 学生物 工程 学院 教育 部 工业 生物技 术重点实验室 无 锡 2 ， 300308 中国科学院天 津 工业 生物技 术研究所 天 津 : 【 】 (Bacillus sp ． ) YX -1 ， 摘要 目的 从 芽胞杆菌 基因组 中克 隆 出一 种 有 机 溶剂 耐 受 型 的葡 萄糖 脱氢 酶 基因 实 ， 。 【 】 现 了该基因在大肠 杆菌中的 高效表达 研究 了重 组 蛋白 的酶 学性质 方 法 依据 芽 胞杆 菌 属 中葡 萄糖 脱氢 ， ， Bacillus sp ． YX -1 ， 酶氨基 酸序列 的保守 性 设计 合 理 引物 钓 取 来 源于 的葡 萄 糖 脱氢 酶 基因 构 建 诱 导 型表 pET28a-gdh ， 。 ， 。 达载 体 于大肠 杆菌中进行表 达 镍 柱 亲和层 析法纯 化 重 组 蛋白 考 察 了重 组 蛋白 的酶 学性质 【 】 786 bp ， 26 1 。 : 结果 葡 萄糖 脱氢 酶 基 因 全 长 为 编 码 个 氨 基 酸 酶 学 研 究 结 果 表 明 该 酶 最 适 反 应 温 度 为 45 ℃ ， pH 8. 0 ; ， 50 % 、 、 1 h ， 最适 值 为 具有 良好 的有机 溶剂 耐受性 于 的辛烷 环 己烷 癸烷 中室温 放 置 后 酶 活仍 90 % ; ， ， D- ， 能保 持 以上 具