赤霉素荧光测定法改进研究廊西北农林科技大学学报.PDF

维普资讯 0 } 57 第2000拳年87第J期‘ ActaUn1V-Ag鬈!!!奁!塑：!!!!!!坐。 VoAl_u28N2o00．40 [文章编 号]1000—2782(2000)040034—06 赤霉素荧光测定法改进研究 “廊5 蓝盔 ，奎 汤 莉 他 ％7 (西北农林科技大学 资源与环境科学系-陕西 杨陵 712100) [摘 要] 研究丁硫酸体积分数、硫 酸用量、样品前处理及温度与时间对赤霉素测定结 、 果的影响，对赤霉素的经典荧光测定法作 了必要改进，并对荧光法与摇林法 的测定值进行了 比较。结果表明：①改进荧光法与经典荧光法测定结果一致；②改进荧光法操作简便 ，不需冰 浴及真空抽干设备j③节省试剂 (50 ～75 )；④ 测定精确度和样品回收率高；⑤反应产物的 荧光值具有一定的时问和温度稳定性 ；@该法适合于发酵液及固态产品中赤霉素的测定 ；⑦ 福林法选择性差，不能用于成分较为复杂的样品中赤霉素的测定 ． ．． [关键词]iI薹童；赤霉素测定。荧光法；福林法 诅慢弛．饭孳如珐．．茂曦，哇眄叛§ [中囤分类号] Q946．885 ．5 [文献标识码] A 赤霉素 (GA)是一种具有高度生理活性的生物激素。GA发酵液和 固态发酵产品中 GA含量测定十分重要。目前赤霉素的测定方法主要有两大类：其一为生物法 【，其二为 理化测定法，如荧光比色法 ]、溴酸钾滴定法 1【]、福林反应法 3【]、磷铝杂多酸法[以及气 相和液相色谱法等。气相和液相色谱法比较准确，但分析费用高，一般实验室无条件测定。 溴酸钾滴定法 选择性较差 ，不能用于发酵液中赤霉素测定。荧光法是GA测定的经典方 法，但该法操作过繁，试剂消耗量大 ，且需要真空泵及冰浴等条件 。本研究对原有的荧光法 进行了一些必要改进 (称为GA改进荧光法)，并与福林法的测定结果进行 比较，目的在于 为发酵液及其他成分复杂产品中GA测定提供一种更为有效、快速的方法。 1 材料和方法 1．1 仪器和试剂 仪 器 930荧光光度计，721分光光度计 (上海)。 福林试剂 GA 乙醇溶液 (20mg／L)，乙酸乙酯，浓硫酸，0．5mol／L盐酸溶液，0．2 mg／L荧光黄溶液 。 1．2 方 法 经典荧光法[】l和福林法 。GA 改进荧光法如下。 1．2-1 待测样品制备 ①液体发酵样品。将发酵液离心 ，取上清液过滤，滤液用 0．5 mol／L盐酸调pH至 1。吸取pH=1的滤液 1mL于 5mL具塞刻度试管中，加入 乙酸乙酯 2mL，加塞剧烈振荡，静置分层，上层即为GA萃取液。② 固体发酵样品。取固体样 1份 ， 加 4份蒸馏水，30℃保温浸提 1h，离心过滤，滤液中GA 萃取方法同上。 [收稿 日期] 1999—07—20 [作者简介] 薛泉5~(1957 )，男．尉教授。 维普资讯 篁 塑 壁塞重量!壹茎童蒌 型塞鲎塑壅塑塑 一 ———兰三一 1．2．2 标 准曲线制作 分别吸取 20mg／LGA 乙醇溶液 0，0．05，0．10，0-15，0·20mL 于 5mL具塞烘干刻度试管中，沸水浴加热蒸干，冷却后加体积分数 85 的硫酸 5mL，加 塞摇匀，40mln后测定荧光值 ，制作标准 曲线 。 1．2．3 荧光光度计较正 每次测定GA前先用 0．2mg／L荧光黄水溶液将荧光计调整 到标准状态 (荧光值 为 j)，以保证各次测值具有 良好可 比性。 1．2．4 待剐样品GA 测定 准确吸取 GA 乙酸