大鼠骨髓间充质干细胞说明书.PDFVIP

大鼠骨髓间充质干细胞说明书 细胞名称：大鼠骨髓间充质干细胞 品 系：Wistar 大鼠 细胞描述：取自3-6 周的Wistar 大鼠骨髓，通过机械法在无菌环境下分离，使用 SD 大鼠间充质干细胞完全培养基（以下简称MSC 完全培养基）贴壁 培养，传代扩增至第二代冻存。本批次细胞经检测，具备分化成为脂 肪、成骨、软骨的能力，建议使用P5 代之前的细胞进行分化实验。 批次/冻存日期：详见 冻存管/培养瓶 标识 细胞倍增周期：20-30 小时 细胞形态: 图1：P2 Rat （Wistar ）MSC 细胞培养条件与方法：见附件1 “细胞培养液及复苏、传代、冻存条件” 细胞分化条件与结果：见附件2 “三向分化检测” 附件1：细胞培养液及复苏、传代、冻存条件 细胞培养液： MSC 完全培养基成分： 成分 浓度 货号 1× Gibco 32571 α-MEM medium with GlutaMA ™-I FBS 10% Biochrom S0115 Pen Strep 1% Gibco 15140 MSC 冻存液 成分 浓度 货号 60% Gibco 32571 α-MEM medium with GlutaMA ™-I FBS 30% Biochrom S0115 DMSO 10% Sigma D2650 MSC 消化液：0.05% Trypsin-EDTA Gibco 25300 1×PBS ：Gibco 14190 建议复苏培养体系：T25 培养瓶 传代频率：3-7 天，待细胞生长到80%-90%满时进行传代 复苏及传代： 复苏 1. 将MSC 完全培养基37℃水浴加热。 2. 将细胞从液氮中取出，37℃水浴迅速解冻，转移到超净台，打开前用75%酒 精擦拭冻存管及管口。 3. 准备一根 15ml 离心管，加入预热的MSC 完全培养基5ml，打开冻存管，将 细胞加入离心管中，混匀。 4. 1000rpm，离心5min 。 5. 吸除上清，加入2ml MSC 完全培养基，吹匀。 6. 复苏到T25 细胞培养瓶中，加入预热的MSC 完全培养基6ml 。 7. 摇匀后放入5% CO2 培养箱中培养。 8. 每3-4 天换液。 传代 1. 培养3-7 天，待细胞生长至80%-90%满时进行传代。及时传代，不要过密生 长。 2. 传代时先将细胞培养液吸除，然后加入1×PBS 2ml 洗一次。 3. 吸除PBS ，加入2ml 预热的0.05% Trypsin-EDTA ，使Trypsin-EDTA 覆盖细 胞表面，放入培养箱，消化2min 。（使用预热的Trypsin-EDTA ，消化时间控 制在2-3min 以内） 4. 取出细胞，加入4ml MSC 完全培养基，轻轻冲洗。将细胞悬液转移到 15ml 离心管中。 5. 1000rpm