第十节基因工程药物制造实例..pptVIP

第十节 基因工程药物制造实例 干扰素（interferon IFN）是人体细胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性，是人体防御系统的重要组成部分。根据其结构可分为α、β、γ、ω等4个类型。α干扰素又依其结构分为α1b、α2a、α2b等亚型，其区别在于个别氨基酸的差异上，早期干扰素是用病毒诱导人白血球产生的，产量低、价格昂贵，不能满足需要，现在可利用基因工程技术并在大肠杆菌中发酵、表达来进行生产。 一、基因工程菌的组建 目的基因的获得：将生产干扰素的白细胞的mRNA分级分离，然后将不同部分的mRNA注入蟾蜍的卵母细胞，并测定合成干扰素的抗病毒活性，结果发现12SmRNA的活性最高，因此用这部分mRNA合成cDNA。将cDNA克隆到含有四环素、氨苄青霉素抗性基因的质粒pBR322中，转化大肠杆菌K12，的几千个重组子克隆，每个克隆都用粗提的干扰素的mRNA去进行杂交，把得到的杂交阳性克隆中的重组质粒DNA放到一个无细胞蛋白合成体系中进行翻译， 一、基因工程菌的组建 对每一个翻译体系的产物进行抗病毒的干扰素活性检测，经过多轮筛选获得了产生干扰素的cDNA，最后将干扰素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体中，转化大肠杆菌进行高效表达。  二、基因工程干扰素的制备 启开种子 制备种子液 发酵培养 粗提半成品制备 半成品检定 分装 冻干 成品检定成品包装 1