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XX大学 毕业论文 细胞膜表达的HLA G诱导免疫耐受性树突状细胞的产生 姓 名： 2014年6月25日 作者：周浩黎纬明张敏刘峥喋邹萍 【摘要】 为了探讨体外诱导免疫耐受性树突状细胞(dendritic cell, DC)产 生的方法及其机制，利用人HLA G1真核表达载体转染K562细胞并与DC共 培养后，用流式细胞术检测DC表面CD80、CD86、ILT3和ILT4分子表达情况, 同时采用氟胸腺密定核昔(3H TdR)掺入法检测DC对T细胞功能的影响。结 果表明，膜表达的HLA G1分子与树突状细胞作用后，DC表而免疫共刺激分 子CD80、CD86表达下调，而抑制性分子ILT3、ILT4表达上调。HLA G1作 用后DC异基因抗原诱导淋巴细胞增殖的活性明显下降。结论：HLA G1分子 可以在体外条件下，下调DC表面免疫共刺激分子水平，促进ILT3、ILT4表达, 诱导免疫耐受性树突状细胞产生。 【关键词】 树突状细胞；HLA G； T淋巴细胞；免疫耐受 Induction of Tolerogenic Dendritic Cells by Membrane Bound HLA G Abstract In order to study how to induce tolerogenic dendritic cells in vitro and its mechanism, the K562 cells transduced with HLA G construct were used to co culture with DC. Then their related immunological changes, such as membrane molecules CD80, CD86, ILT3 and ILT4 expression levels were detected by flow cytometry. Allogeneic proliferation of peripheral blood mononuclear cells (PBMNC) was detected by mixed lymphocyte reaction. The results showed that CD80 and CD86 expressions on DC were downregulated, while ILT3 and ILT4 expressions were upregulated after co culturing with K562 HLA G cells. The DCs were less able to stimulate the allogenic PBMNC. It is concluded that the membrane bound HLA G can upregulate expression of inhibitory receptors ILT3 and ILT4, inducing tolerogenic DC in vitro, which may provide a novel strategy for transplant tolerance induction. Key words dendritic cell; HLA G; T lymphocyte; immune tolerance 移植排斥所导致的移植物抗宿主病(GVHD)是骨髓移植领域的难题。R 前临床免疫抑制剂的应用虽然可以显著降低急性GVHD的发生，但是慢性 GVHD损害的发生仍然难以克服。诱导受者外周免疫耐受被认为可能成为解决 移植后慢性GVHD的有效途径［1］。树突状细胞(dendritic cell, DC)是体内功 能最强的专业性抗原呈递细胞，是活化初始CD4+T细胞最有效的抗原呈递细胞。 近年来，人们逐渐认识到DC在外周免疫耐受中的作用，并寻找诱导免疫耐受性 树突状细胞产生的有效途径［2］。免疫耐受性树突状细胞膜上高表达ILT3和ILT4 分子，它们的可能配体是HLA G［3］。研究发现，HLA G促进心脏移植后的 外周免疫耐受状态的产牛，其机制可能与诱导树突状细胞耐受有关［4］0木实验 希望通过对HLA G诱导DC免疫耐受的机制的研究，探讨诱导免疫耐受性DC 产生的新的有效方法。 材料和方法 主要试剂、细胞株及HLA G1真核表达质粒 RPMI 1640培养液、DMEM培养液、G418、TRIZOL —步法提取RNA试 剂及逆转录试剂盒均购于Gibco公司，Lipofectamine 2000脂质体转染试剂盒购 于Invitrogen公司，小牛血清购于杭州四季青公司。慢性粒细胞白血病细胞株 K562、绒毛