生物化学实验技术教程 赵亚华主编.pdfVIP

第 1 页 第 章　　生物化学实验原理与方法概论 生物化学 的实验研 究基于千差万别 的生物在分子水平上 的统一性 。细胞是生物 的基本 结构单位和功能单位 ，各种生物 的细胞含有许 多共 同的化学组成 、共 同的代谢途径和共 同 的细胞调控机制 ，如不 同来源 的蛋 白质 由 种基本氨基酸组成 ， 由 种脱氧核苷酸 组成 ，生物大分子 （核酸 、蛋 白质 、酶 、糖类 、脂类 的统称 ）合成和 降解途径 中中间产物 和酶 的功能都极其相似 。因此 ，用一种生物材料进行生物化学实验所获得 的知识 ，可 以推 知其他生物 （包括人 ）体 内的分子机理 。 对上述细胞组分 、中间产物和调控 因子进行生物化学研究的第一步一般是选取合适 的 生物材料 、破碎细胞 ，将 目的物提取 、分离和纯化 出来 ，然后再根据实验 目的，综合利用 各种生物化学分析技术和检测方法研 究其化学性质和生物学特性 。本章将主要从分离纯化 的角度简要介绍这些生物化学分析技术 ，并对实验材料 的准备 、 目的物提取和分离纯化技 术 以及生物化学检测技术等几个方面作简单的介绍 。 一 、生物化学实验常用 的生物材料 一般材料 生物化学实验常用 的生物材料分为天然生物材料和人工生物材料两大类 。天然生物材 料一般是在 自然界 易采集 的、 目的物含量较高 的生物个体 、器官或组织 。如禾本科作物种 子萌发期 间，淀粉大量水解 ，淀粉酶含量丰 富 ，可作为提取淀粉酶 、进行生物化学实验 的 材料 。再如小麦黄化幼苗细胞分裂旺盛 ， 容易提取和纯化 ，且不受叶绿素的干扰 ， 适宜用作核酸生物化学与分子生物学实验的材料 。 人工生物材料种类繁多 。生物科学从群体 、个体到分子水平有很多分支 ，生态学 、植 物分类学 、动植物育种学和发酵工程学等细胞水平 以上 的科学领域 的研 究工作 ，为 以破碎 细胞在分子水平上进行深入研究为特点的生物化学实验准备 了大量 的基础性实验材料 。 新 品种材料 遗传变异和 自然选择使生物具有高度 的多样性 。分类学家发现 的新物种和育种学家培 育和找到 的具有优 良性状 的新 品种和野生种 ，不断为包括生物化学在 内的整个生命科学提 供新 的生物实验材料 。 随着生物技术 的发展 ，分子育种技术和经典育种技术相结合将产生越来越 多的 自然界 并不存在 的新物种 。生物化学实验技术将成为在分子水平上研 究这些新物种材料 的主导研 究方法 。 组织培养 植物细胞全能性 的发现和组织培养技术 的发展 ，使植物器官 、组织和细胞 的离体培养 繁殖在越来越多的物种 中获得成功 。特别是植物细胞培养 ，由于广泛采用 了微生物遗传学 的方法进行操作 ，产生 了大量生化突变型细胞 ，这些细胞及其愈创组织 ，甚至 由其繁育成 第 2 页 功的植株个体 ，是生物化学研究不可缺少的新型材料 。 血液样品 收集动物或人 的血液是动物生化最常用 的实验材料 。在收集时应使用干燥 、洁净 的器 皿 ，以防溶血 。 全血 ：取 出血液后 ，迅速盛于含有抗凝剂 的干燥试 管 内混匀 （注 意避免激 烈振 荡），即得全血。 常用 的抗凝剂有草酸盐 、柠檬酸盐 、氟化钠 、肝素等 ，需根据实验 的要求而定 ，一般 情况 下使用廉价 的草酸盐 。抗凝剂 的使用量不宜过 多 ，通 常每毫升血液加 草 酸 盐 、或 柠檬酸盐 、或 氟化钠 、或 肝素 。可将抗凝剂配成适 当 浓度 的水溶液 ，然后取 放在 收集血 的小试管 中，横放蒸干 （用肝素为抗凝剂 时 ， 蒸干温度不超过 ，备 用 。 血浆 ：全血离心后的上清液即为血浆 。 血清 ：不加抗凝剂 的血液在室温下 自行凝 固后 ，约需