选修一酵母细胞固定化.PPT

B、搅拌要彻底充分，使两者混合均匀，以免影响实验结果的观察 （5）固定化酵母细胞 以恒定的速度缓慢的将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，将形成的凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30min左右 ① 过程 ②注意事项 A、可利用海藻酸钠制成不含酵母菌的凝胶珠，用作对照 B、海藻酸钠胶体在CaCl2这种电解质的作用下，发生聚沉，形成凝胶珠，需稳定30min左右 （三）用固定化酵母细胞发酵 ①将固定化酵母细胞（凝胶珠）用蒸馏水冲洗2－3次，洗去凝胶珠表面多余的电解质溶液 1、过程 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法。一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的 ②将150ml质量分数为10％的葡萄糖溶液转移至200ml的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于25°C下发酵24h 2、注意事项 ①控制好发酵温度，一般是室温25 °C ②发酵时间可视具体情况而定，一般时间稍长一些，效果明显 ③可用不含酵母的凝胶珠做相同的处理，对照实验结果 （一）观察凝胶珠的颜色和形状 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 （二）观察发酵的葡萄糖溶液 利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒味 课题成果评价 * 第四节 酶工程简介 教学目标： 知识目标 1、酶工程的概念以及有关生产和应用酶制剂的基础知识（A） 2、酶工程与基因工程、细胞工程和发酵工程之间具有相互交叉渗透的关系（A） 能力目标 1、培养学生获取、分析与处理信息的能力 2、培养学生自学能力 情感目标 1、通过发酵工程的相关信息资料的收集，培养学的STS观点 2、通过发酵工程发展的历史的学习，培养学生热爱科学、勇于探索的精神 教学重点： 1、酶制剂的生产和应用 2、生物工程各分支领域之间的密切关系 教学难点： 生产酶制剂的基本原理 教学手段和方法： 多媒体课件；引导自学和讨论 课时安排： 一课时 作业 复习题 酵母细胞的固定化 一、基础知识 1、酶制剂的概念和种类 （一）酶制剂 含有酶的制品 ①定义： 多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶 ②种类： A、液体酶制剂 治疗某些胃病的胃蛋白酶液 B、固体酶制剂 2、酶的生产 ①提取法 定义：采用一定的技术直接从动植物或微生物的组织、细胞中将酶提取出来 优点： 简单易行，在动植物或微生物资源丰富的地区具有应用价值 实例：在屠宰厂，可以从家畜胰脏中提取出胰酶；在水果加工厂，可以从菠萝皮中提取出菠萝蛋白酶 缺点： 要有充足的原材料，广泛应用受到限制 ②发酵法 定义：通过微生物发酵获得所需要的酶 如果是胞外酶，可以从发酵液中直接提取；如果是细胞内酶，则可将细胞弄碎再经过提取纯化而得到 易培养、繁殖速度快、便于大规模生产 优点： 提取方式： ③化学合成法 缺点： 成本高、已知分子结构的酶 提取出来的酶还要经过分离、纯化，再加入适量的稳定剂和填充剂，制成相应的酶制剂后才能用于催化化学反应 3、酶的提取和分离纯化 ①酶的提取 盐溶液提取法、碱溶液提取法、有机溶剂提取法 适宜的温度和pH和保护剂 方法： 条件： ②酶的分离提纯 沉淀技术（密度梯度离心法） 层析技术 方法： 4、酶制剂特点 ①天然酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活 ②溶液中酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本 ③反应后，酶会混在产物中，影响产品质量，难以在工业生产中广泛应用 （二）固定化酶 固定化酶是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂 （三）固定化细胞 将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术 被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞 固定化技术： 固定化细胞： 类型 优点 不足 直接使用酶 催化效率高，低耗能、低污染等 对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量 固定化酶 酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用 一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的 固定化细胞 成本低、操作容易、对酶活性的影响更小、可以催化一系列的反应、容易回收 固定后的酶或细胞与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降由于大分子物质难以自由通过细胞