细胞和分子免疫学实验技术 金伯泉主编.pdfVIP

第 1 页 第一章　　免疫血清 的制备 免疫血清 的制备是一项常用 的免疫学实验技术 。高效价、高特异性的免疫血清可作 为免疫学诊断的试剂 （如用于制备免疫标记抗体等 ），也可供特异性免疫治疗用 。免疫 血清 的效价高低取决于实验动物 的免疫反应性及抗原的免疫原性 。如 以免疫原性强的抗 原刺激高应答性 的机体 ，常可获得高效价 的免疫血清 ；而使用免疫原性弱 的抗原免疫 时，则需同时加用佐剂 以增强抗原的免疫原性 。免疫血清 的特异性主要取决于免疫用 的 抗原的纯度 。因此 ，如欲获得高特异性的免疫血清 ，必须预先纯化抗原 。此外，免疫方 案包括抗原的剂量、免疫途径、免疫次数 以及注射抗原的间隔时间等 ，也是影响免疫血 清效价 的重要 因素。 一 、兔免疫血清 的制备 （一 ）原理 具有免疫原性 的抗原可刺激机体相应 细胞增殖 、分化形成浆细胞并分泌特异性 抗体 。由于抗原分子表面 的不 同抗原决定簇为不 同特异性 的 细胞克隆所识别 ，因此 由某一抗原刺激机体后产生 的抗体 ，实际上为针对该抗原分子表面不 同抗原决定簇 的抗 体混合物 （即多克隆抗体 ）。另外，抗体 的产生具有 回忆应答 的特点，这是 由于记忆性 细胞和记忆性 细胞参与再次应答所致 。在基础免疫 的基础上 ，多次重复注射免疫 原 ，不仅可获得高效价抗体 ，同时 由于抗体亲和力 的成熟 ，抗体 的亲和力可 明显提高 。 （二 ）免疫方案 免疫方案根据抗原 的性质不 同而异 。下面 以制备家兔抗人 免疫血清为例作一叙 述 ，以供参考 。 用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛，用碘酒和酒精消毒皮肤 。 第一次免疫 ：用 注射器吸取弗 氏完全佐剂 （ ）乳 化 的抗 原 （人 （下 称 ）液 ，每侧脚掌皮下各注入 第 2 页 第二次免疫 ：间隔 后 ，于两侧腘窝及 鼠蹊部肿大 的淋 巴结 内注入弗 氏 不完全佐剂 （ ，每个淋巴结注 ，其余注入淋 巴结附近 的皮下共 。如 淋 巴结未肿大或肿大不明显时，直接注入两侧腘窝及 鼠蹊部皮下。 间隔 后 ，从耳静脉采血 ，分离血清 ，以双相琼脂扩散试验 测定免疫血清 的抗体效价 （即试血 ）。效价至少应达到 ： 以上时才能放血 ；也可采 用 方法检测血清效价 ， 由于 法十 分敏感 ，抗体效价往往可达 到 ： 以上。 若效价未达到要求 ，可用不加佐剂 的抗原液 （人 ）耳静脉 内注射免疫 ，即 于 周 内注射 次，分别为 及 。间隔 周再试血。如效价达到要 求应立 即放血 。另外，也可在第 次免疫后 ，以 乳化 的抗原 （人 （简 称 再免疫 次。注射部位、剂量和间隔均同第 次，再试血测定抗体效价 ，如效 价达到要求立即放血。 （三 ）放血 心脏采血法 家兔仰面，四肢缚于动物固定架上 （或 由助手抓住四肢固定）。 剪去左胸部兔毛 ，消毒皮肤。 用左拇指摸到胸骨剑突处 ，食指及 中指放在右胸处轻轻 向左推心脏 ，并使心脏 固定于左胸侧位置 。然后，以左拇指触摸心脏搏动最强的部位 。 用 注射器 （连接 号 针 头 ），