水稻分蘖角度基因TAC1的克隆及其功能分析.DOCVIP

附件2 论文中英文摘要 作者姓名：余柏胜 论文题目：水稻分蘖角度基因TAC1的克隆及其功能分析的研究 作者简介：余柏胜，男，1967年10月出生，2002年9月师从于中国农业大学孙传清教授，于2007年12月获博士学位。 中 文 摘 要 作为构成水稻株型的关键因子之一，分蘖角度是一个影响到水稻群体光合效率、植株抗逆性能，并最终影响谷物产量和品质的重要农艺性状，然而迄今对其形成和调控的分子机理还知之甚少。本研究利用一个株型松散的籼稻品种“IR24”和其渗入了粳稻品种“Asominori”染色体片断、株型紧凑的渗入系“IL55”作为试验材料，通过图位克隆的方法，克隆了控制水稻分蘖角度的一个重要新基因Tiller Angle Controlling （TAC1），并对其结构和功能进行了比较深入的研究,为诠释水稻分蘖角度控制的分子机理奠定了良好基础。主要结果如下： 1. 遗传分析表明，松散株型对紧凑株型为不完全显性，并为单个核基因控制；利用IR24和IL55杂交F2大群体中鉴定出的1918个紧凑株型单株构建的隐性定位群体，将分蘖角度基因精细定位在第9染色体长臂端一个35kb的区段内。通过遗传互补试验，从8个候选基因中确定了目标基因，命名为Tiller Angle Controlling1 （TAC1）。 2. 来自IR24的TAC1由5个外显子和4个内含子组成，编码一个由259个氨基酸组成，可能为禾本科植物特有的功能未知的新蛋白。来自IL55的tac1在对应于TAC1第四内含子的3’拼接点处，基因组序列由“agga” 突变为 “ggga”，导致该内含子在mRNA加工过程中不能正常剪切，进而导致 poly(A)加尾提前，最终导致了与TAC1 cDNA结构上的差异，即具有完全不同的3’非翻译区（3’-UTR），而具有相同的5’非翻译区（5’-UTR）和近似的编码区（仅有一个单碱基的差异，但编码的氨基酸相同）。 3. Real-time PCR表达比较分析结果，TAC1基因mRNA水平显著高于tac1，表明tac1 3’-UTR导致mRNA稳定性降低；TAC1过表达载体和RNAi载体转基因后代的株型和mRNA水平分析结果表明，TAC1上调表达导致分蘖角度增大，而下调表达导致分蘖角度减小。表明TAC1 mRNA水平决定分蘖角度的大小。 4. 不同组织器官表达谱分析和TAC1 启动子驱动GUS染色结果显示，TAC1主要在分蘖基部不伸长节边缘维管束环外侧的皮层薄壁组织及所有节与叶鞘交接部位的叶鞘枕（sheath pulvlnus）表达。前者是分蘖基部向上弯曲不对称生长的部位，而后者是禾本科植物感受重力的器官，推测TAC1可能作为水稻分蘖负向重力极性生长的负调控因子，在水稻分蘖角度和株型的控制中发挥重要作用。 5. 对不同水稻材料TAC1第四内含子的3’拼接点序列进行分析，在105个粳稻材料中有97个表现为tac1类型，74个籼稻材料中有58个表现为TAC1类型，而21份野生稻材料全部表现为TAC1类型，说明TAC1是水稻原始基因型，而tac1基因型在粳稻中的广泛分布，可能是人类在粳稻驯化和栽培过程中为适应密植的需要而人工选择的结果。 关键词： 水稻，分蘖角度，图位克隆，内含子，3’拼接点，3’非翻译区，驯化 Isolation and Functional Analysis of a Novel Gene, TAC1, Controlling Tiller Angle of Rice (Oryza sativa L.) Yu Baisheng ABSTRACT Tiller angle, as a key component factor of rice plant architecture, strongly influence the suitability of rice cultivation, light capture, disease resistance and grain yield. However, the molecular basis for tiller angle remains unknown. In this study, through a map-based cloning approach, a novel gene controlling tiller angle of rice, Tiller Angle Controlling1(TAC1), was identified and its functional characterization was investigated. The main results were as follows: 1. TAC1 was mapped to a