生物化学PPT教学课件 蛋白质的分离与纯化.pptVIP

* * 液态保存 优点：免去干燥这一步骤，生物大分子的生理活性和结构破坏较少； 缺点：需要较严格的防腐措施，贮藏时间不能太长，如样品量大时封装运输不方便，实验室常采取少量安瓿封存法。 液态贮藏注意事项如下： 样品不能太稀，必须浓缩至一定浓度后才能封装贮藏，样品太稀时易引起生物大分子变性作用。 一般需加入防腐剂和稳定剂。蛋白质和酶常用的稳定剂有蔗糖、甘油等，酶也可加入底物和辅酶以提高其稳定性。 贮藏温度要求较低。大多数在0℃左右冰箱保存即可，有的则要求更低温度。 * * 离子交换层析 离子交换层析（Ion Exchange Chromatography）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。 常用的离子交换剂有：离子交换纤维素、离子交换葡聚糖和离子交换树脂 。  * * 离子交换层析中，基质是由带电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换剂，带有负电荷的称之阳离子交换剂。 当蛋白质处于不同的pH条件下时，其所带电荷的性质和数目都会不同。 阴离子交换剂可以结合带负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。 阳离子交换剂结合带正电荷的蛋白质，结合的蛋白也可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高