中性粒细胞在不同品系正常小鼠角膜的分布及其与角膜创伤修复的关系.PDFVIP

· 780 中华实验眼科杂志2014年 9月第32卷第9期 ChinJExpOphthalmol，September2014，Vo1．32，No9 · 实验研 究 · 中性粒细胞在不同品系正常小鼠角膜的分布 及其与角膜创伤修复的关系 张红敏 刘素素 陈国铭 柳慧 窦新岩 王素娟 李金 王丽娅 【摘要】 背景 以往人们通常认为角膜无血管、无髓系来源的免疫细胞存在。C57BL／6J小鼠、BALB／c 小 鼠和裸 鼠是眼科免疫学基础研究的常用模型，这些小 鼠的角膜是否存在天然免疫 的关键细胞—— 中性粒 细胞是值得关注的问题 。 目的 研究实验室常用的C57BL／6J鼠、BALB／c鼠和裸 鼠正常角膜的中性粒细胞 分布特征及其与角膜创伤修复的关系，为相关研究提供依据。 方法 选取角膜正常、1O～12周龄的SPF级 雄性 C57BL／6J鼠、BALB／c鼠和 BALB／c背景的裸 鼠各 16只，取 3种小 鼠各 8只制备成 中央区相连的4瓣角 膜铺片，并以角膜周边血管缘为界向内以3个同心圆分区。分别用Gr一1一FITC抗体和 CD31／PECAM一1一PE抗 体对角膜 中性粒细胞和血管进行免疫荧光染色，用免疫荧光显微镜和 AR软件测量角膜血管面积并计数 中性 粒细胞 。选取 3种小 鼠各 8只制备角膜创伤模型，用无菌手术刀片 以角膜 中央为 中心做十字划痕，深度至角 膜前弹力层。创伤后即刻 (0h)、12h、24h用2g／L荧光素钠点眼，荧光显微镜下以AR软件计算不同时间点 的创伤面积。于划痕后 24h取小 鼠角膜制备铺片，用 Gr一1一FITC抗体和 CD31／PECAM一1一PE抗体行荧光染色， 比较 3种创伤小 鼠角膜 的血管分布、中性粒细胞 的数量和分布情况 。实验动物的饲养与使用均遵循美 国视觉 与眼科研究协会制定的科研动物使用规范 。 结果 正常 C57BL／6J小 鼠、BALB／c小 鼠和裸 鼠角膜 中性粒细 胞总数分别为(1733±237)、(353±96)和 (16014-223)个 ／角膜 ，BALB／c小 鼠角膜 中性粒细胞数 明显少于 C57BL／6J小 鼠和裸 鼠，差异均有统计学意义 (P0．01)。3种正常小 鼠角膜缘均可见血管分布 ，BALB／c小 鼠 角膜缘血管面积明显小于 C57BL／6J小 鼠和裸 鼠，C57BL／6J小 鼠角膜缘血管面积 明显大于裸 鼠，差异均有统 计学意义(P0．O1)。3种正常小 鼠中性粒细胞 的数量与血管面积均呈 明显正相关 (C57BL／6J：r=0．936， P=0．001；BALB／c：r=0．939，P=0．001；裸鼠：r=0．935，P=0．001)。角膜划痕后 24h，C57BL／6J小 鼠和裸 鼠 的创伤面积均明显大于 BALB／c小 鼠(均 P=0．000)，且以裸 鼠的创伤面积最大 。角膜划痕后 C57BL／6J模型 鼠、BALB／c模型 鼠和模型裸 鼠的角膜上 中性粒细胞数 目分别为(3340~417)、(1235±337)和 (4680~450) 个 ／角膜 ，BALB／c模型 鼠角膜上 中性粒细胞数 目明显少于 C57BL／6J模型 鼠和模型裸 鼠，差异均有统计学意 义 (均 P=0．000)。3种小 鼠角膜创伤面积与 中性粒细胞数 目均呈 明显正相关 (C57BL／6J小 鼠：r=0．805，P= 0．016；BALB／c小 鼠：r=0．943，P=0．000；裸 鼠：r=0．916，P=0．001)。 结论 不 同品系的正常小 鼠角膜 中性 粒细胞分布 的数 目取决于角膜血管的分布和面积 ，角膜损伤后小 鼠角膜 中性粒细胞数 目增加 ，角膜 中性粒细 胞数 目较少 的小 鼠其角膜创伤修复速度较快，提示角膜血管网部位 中性粒细胞 的基础状态可能与角膜对感 染的易感性 以及感染后 的早期反应有关 。 【关键词】 角膜；感染；中性粒细胞 ；疾病模型；动物；C57BL／6J鼠；BALB／c鼠；裸鼠 Distribution traitofneutrophilsin corneasofdifferentstrainsofnormalmiceand their effectson corneal woundhealing ZhangHongmin，LiuSusu，ChenGuoming，LiuHui，DouXinyan，WangSujuan，