绵羊羊膜上皮细胞治疗兔桡骨缺损模型的研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（７）：３１３６ 绵羊羊膜上皮细胞治疗兔桡骨缺损模型的研究   朱雪敏　刘俊平 　杨银凤　王秀梅　米　焱　李海军　李　砚　孟庆刚　曹贵方 （内蒙古农业大学动物组织胚胎与发育生物学研究室　呼和浩特　０１００１８） 摘要　为了确定绵羊羊膜上皮细胞在体内向骨组织的分化能力，实验在分离培养绵羊羊膜上皮 细胞并对其进行干细胞特性的鉴定的基础上，制作新西兰大白兔桡骨１３ｍｍ骨缺损模型，随机分 ７ 组对其进行注射绵羊羊膜上皮细胞实验。高剂量组：移植细胞５×１０个；低剂量组：移植细胞５ ６ ×１０个；对照组：生理盐水。细胞移植后２、４、８周拍摄Ｘ光片观察骨缺损部位的缺损修复情况； 相应时段取骨缺损部位新生骨进行组织学观察：分析骨小梁生成数量和骨的改建时期。实验结 果显示，高剂量实验组在移入细胞第８周，骨缺损完全修复，且同期高剂量组新骨生成的数量和质 量明显高于低剂量组，低剂量组优于对照组。由此可见，绵羊羊膜上皮细胞不仅可以在不同种动 物间进行移植，而且对骨缺损有良好的修复能力。 关键词　绵羊　羊膜上皮细胞　干细胞特性　桡骨缺损 中图分类号　Ｑ２ 　　骨缺损的治疗修复对于临床外科是一个富有挑战 检查发现损伤腱的大小和横断面的面积均快速复原， 性的难题，愈合时间长，愈后效果不理想。以往常用治 提示马羊膜衍生的细胞对于细胞治疗的临床应用是有 疗骨缺损的方法均没有取得令人满意的效果。以干细 ［１５］ ［１６］ 效的 。Ｗｌｏｄａｒｓｋｉ等 发现人ＡＥＣｓ细胞系ＷＩＳＨ及 胞为基础的组织工程学为骨缺损的修复提供了新思 ＦＣ植入裸鼠体内均可分化成软骨和成骨。本研究在对 路。羊膜上皮细胞（ａｍｎｉｏｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＡＥＣｓ）是胎 分离培养的绵羊ＡＥＣｓ成功进行干细胞特性鉴定的基 盘羊膜衍生的细胞，研究表明ＡＥＣｓ表达与胚胎干细胞 础上，为了进一步验证其在体内的分化成骨的可行性 相关的一些表面标志物，例如：ＳＳＥＡ３，ＳＳＥＡ４，ＴＲＡ１ 及修复骨缺损的效果，将未诱导分化的绵羊ＡＥＣｓ静脉 ６０，ＴＲＡ１８１，同时表达胚胎干细胞多能性的专一性转 注射移植到兔桡骨缺损模型，结果显示绵羊ＡＥＣｓ快速 录因子Ｏｃｔ４和Ｎａｎｏｇ，具有干细胞特性，能够向内胚层 而准确的修复了骨缺损组织。 （肝细胞），中胚层（骨细胞和心肌细胞）和外胚层（神 ［１６］ １　材料与方法 经细胞）分化 。ＡＥＣｓ的分化潜能对于细胞疗法的 发展提供了帮助。ＡＥＣｓ在临床治疗肝病［２，７８］、肺 １．１　材　料 ［９１０］ ［１１］ ［１２］ ［１３］ １．１．１　实验材料　健康新西兰大白兔３０只，体重２．５ 病 、心脏病 、糖尿病 、神经系统疾病 等一些 疑难病症的治疗研究中取得了一定的疗效。Ｍｕｔｔｉｎｉ ～３．０ｋｇ，雌雄不限。来自内蒙古农业大学兽医学院动 ［１４］ 物园，兔子在正常情况下饲养，自由饮水和有规律饲喂 等 利用未诱导分化的绵羊ＡＥＣｓ治疗绵羊跟腱损伤 模型，发现绵羊ＡＥＣｓ在病理部位存活一个月，且没有 兔粮。实验中动物操作按动物法规执行和完成。 任何毒副作用，细胞活跃、大量增殖，修复损伤的肌腱 １．１．２　主要的试剂及器械　ＤＭＥＭ／Ｆ１２、非必需氨基 组织。为了研究马ＡＥＣｓ的潜在疗效和细胞耐受性，将 酸、ＴｒｙｐＬＥ、胎牛血清、２巯基乙醇、胰岛素铁硒传递蛋 其同种异体注射到跟腱损伤的三匹马，结果利