利用荧光光谱法研究脲和盐酸胍诱导谷氨酸脱羧酶-高校化学工程学报.PDF

第30 卷第3 期 高 校 化 学 工 程 学 报 No.3 Vol.30 2016 年 6 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities June 2016 文章编号：1003-9015(2016)03-0648-07 利用荧光光谱法研究脲和盐酸胍诱导谷氨酸脱羧酶的去折叠 1 2 3 3 3 1 1 1,3 胡 升 , 黄 俊 , 柯丕余 , 赵伟睿 , 吕常江 , 王进波 , 尚龙安 , 梅乐和 (1. 浙江大学 宁波理工学院, 浙江 宁波 315100; 2. 浙江科技学院 生物与化学工程学院, 浙江 杭州 310023; 3. 浙江大学 化学工程与生物工程学院, 浙江 杭州 310027) 摘 要：利用荧光光谱法研究了盐酸胍和脲诱导的谷氨酸脱羧酶野生酶和突变酶K413A 的去折叠过程，以探索与酶稳 定性相关的构效关系。以盐酸胍为变性剂时，野生型酶和突变酶K413A 在激发波长为280 nm 的荧光图谱中色氨酸的 最大发射峰均发生红移，色氨酸荧光强度呈现先上升再下降的趋势；以脲为变性剂时，两种酶荧光图谱中色氨酸的最 大发射峰同样发生红移，但色氨酸荧光强度持续下降。无论是以盐酸胍还是以脲作为变性剂时，野生型酶和突变酶 的去折叠过程都符合 三态模型 ，说明随着变性剂浓度的增加，野生型酶和突变酶 先从天然态转变为部 K413A “ ” K413A 分折叠中间态，并最终转变为去折叠状态。此外，考察了变性剂对谷氨酸脱羧酶活力的影响，当以盐酸胍为变性剂时， 野生型酶和突变酶K413A 半失活的盐酸胍浓度分别为0.4 mol L1 和0.7 mol L1，而半失活的脲浓度分别为1 mol L1    和 1 。研究表明，突变酶 的热力学稳定性比野生型酶更强， 位点与 的结构刚性有重要联系。 2 mol L K413A K413 GAD  关键词：谷氨酸脱羧酶；脲；盐酸胍；荧光相图法；蛋白质去折叠 中图分类号： 文献标识码： ： Q813.11 A DOI 10.3969/j.issn.1003-9015.2016.03.021 Study on Glutamate Decarboxylase Unfolding Induced by Urea and