基于蚕丝蛋白静电纺丝复合纳米纤维的构建及其相关应用分析-生物医学工程专业论文.docxVIP

中文摘 中文摘要 重庆大 重庆大学博士学位论文 I I PAGE PAGE VI 摘 要 静电纺丝技术构建的生物支架材料在组织工程领域具有巨大的应用潜力主要 归因于其人为可控的纳米级纤维结构与化学组分能够充分模拟天然细胞外基质的 结构与功能。目前，由天然的与人工合成的聚合物组成的复合纳米纤维能够结合 天然组分的生物学特性与人工聚合物的可降解行以及力学性质，作为一种新型纳 米结构生物支架材料在组织工程领域中得到了广泛的关注。在本论文中，首先， 我们通过将无水相乳液乳化静电纺丝技术一步法构建基于天然蚕丝蛋白丝素蛋白 (Silk fibroin, SF)与人工合成聚合物聚己内酯(Polycaprolactone, PCL)功能性复合纳 米纤维支架，并进行了系统的材料表征、药物释放与生物相容性的评估；第二， 通过乳化静电纺丝技术构建了天然蚕丝蛋白丝胶蛋白(Silk sericin, SS)与 PCL 复合 纳米纤维并系统的验证了其体内外生物相容性；最后，为了缓解静电纺丝支架非 特异性蛋白吸附与细胞侵润的局限性，我们通过乳化静电纺丝构建了一种抵抗蛋 白吸附、多孔的透明质酸(Hyaluronan, HA)/SF/PCL 三元复合功能性纳米纤维支架。 主要的内容与结果如下所列： ①乳化静电纺丝构建 SF/PCL “核-壳”结构纳米纤维与体外细胞相容性以及药 物释放的研究 我们通过无水相乳化电纺技术构建了 SF/PCL “核-壳”的纳米纤维，使用扫描 电镜、透射电镜、傅立叶红外光谱、X 射线衍射、示差热量扫描、水接触角以及 力学拉伸测量等多种技术针对纤维的理化性质进行了系统的表征，并解释了 SF/PCL 乳化电纺所产生“核-壳”结构的机制。异硫氰酸荧光素（FITC）体外释放 实验评估了“核-壳”结构纳米纤维药物持续释放的潜力。我们发现增加 SF 组分比 例能够增强整体纤维支架的亲水性同时降低纤维直径。通过甲醇处理后的 SF/PCL 纳米纤维支架中 SF 构象能够从随机卷曲模式向 β-折叠结构转变，进而促进了纳 米纤维的结晶行为并增强了材料整体的力学拉伸强度。体外细胞实验评估 SF/PCL 纳米纤维作为组织工程支架的应用潜力，结果证明混合材料能够促进皮肤成纤维 细胞的粘附与增殖。我们的结果验证了单喷头乳化电纺技术构建的由天然蛋白 SF 与人工合成聚合物 PCL “核-壳”结构纳米纤维的可行性，构建的复合纳米纤维支 架具有持续的药物释放能力在组织工程领域中具有应用潜力，在理论与技术上为 后续的实验奠定了基础。 ②乳化静电纺丝构建 SS/PCL 复合纳米纤维与体内外生物相容性研究 目前，SF 蛋白应用于生物材料设计是一个理想的选择与途径。然而，归因于 免疫排斥反应、较弱的结构稳定性与高水溶性，SS 作为蚕丝的另一种天然蛋白组 分在生物材料领域并没有得到广泛的关注。我们首次通过解剖五龄蚕中部腺体提 取天然状态下的 SS 蛋白进行后续的静电纺丝纳米纤维材料的构建与生物相容性 的研究。为了提高 SS 蛋白的可纺性与材料结构的稳定性，使用 PCL 与 SS 进行 混合并通过无水相乳化静电纺丝技术成功构建了纳米纤维支架。SS/PCL 支架通过 扫描电镜、透射电镜与傅立叶红外光谱等多种技术进行了系统的表征。力学拉伸 测量与水接触角实验揭示了 SS/PCL 混合支架相比较于纯 PCL 支架能够加强材料 的力学性质与亲水性。我们也分析了在混合支架中的 SS 组分对人源皮肤成纤维 细胞 1 至 5 天培养后的细胞形态与增殖情况的影响，结果发现 SS/PCL 组分在合 适的比例下能够明显促进细胞增殖同时出现了更加伸展的细胞形态。转化生长因 子(Transforming growth factor β1, TGF-β1)与 I 型胶原的 mRNA 基因水平在 SS/PCL 支架中的表达出现了上调。最后，体内动物实验显示了 SS/PCL 支架相比较于纯 PCL 支架具有较低的纤维化组织的形成以及较少的巨噬细胞粘附，意味着这种生 物相容性支架在组织工程领域中具有应用潜力。 ③乳化静电纺丝构建 HA/SF/PCL 三元复合纳米纤维与非特异性蛋白吸附以 及细胞侵润的功能性研究 前文中通过混合天然 SF 与人工合成聚合物 PCL 制备静电纺丝纳米纤维支架 材料具有结合力学、结构、生物化学性质协同效用应用于组织工程领域。然而， 纳米纤维结构过高的比表面积与固有的过小孔径能够导致大量的非特异性蛋白吸 附与细胞难以侵润至材料内部的局限性。因此，我们构建了一种抵抗蛋白、多孔 的纳米纤维支架，是由 HA、SF、与 PCL 三种聚合物溶液混合并通过乳化静电纺 丝技术构建的三元复合纳米纤维。我们对纤维支架的纳米结构、化学组分、力学 性质、亲疏水性与蛋白吸附性等理化性质进行了表征与评估。溶