新生SD大鼠原代细胞培养相关问题的探讨-中国毒理学会.DOCVIP

SD乳鼠心肌细胞原代培养中消化条件相关问题的探讨 马爱翠，严建燕，孙祖越* （上海市计划生育科学研究所药理毒理学研究室，中国生育调节药物毒理检测中心，上海 200032） SD乳鼠原代心肌细胞成活率过低一直是有待解决的关键之处，其中消化分离过程对细胞成活率影响很大。因此，对心肌细胞消化分离过程中需注意的关键事项进行探讨。 消化酶：原代培养前常采用消化分离法消化组织，使组织块分散为单个细胞，利于细胞贴壁生长。常用的消化酶包括：胰蛋白酶、胶原酶I或II和透明质酸酶，其中（1）胰蛋白酶消化能力作用较强，但对细胞间质中的蛋白成分及肌细胞膜蛋白有很强的破坏作用，容易造成心肌细胞损坏，目前常用浓度为0.05%~0.25%，而且胰蛋白酶与EDTA或其他酶的联合应用，可减小对细胞的损害，具有更好的消化分离效果；（2）胶原酶作用较缓和，可消化心肌组织中的胶原纤维，因此适当的应用胶原酶可充分分散成团的心肌细胞，对细胞的损伤小，但由于心肌组织中存在的胶原类型不单一，I型和II型胶原酶的联合应用消化效果更佳，同时常与胰蛋白酶的结合，可提高消化效率和细胞活力，但过程较复杂；（3）透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用； 消化时间：消化过度可使肌原纤维出现萎缩，对细胞的存活率有一定影响，或丧失贴壁能力，消化不足细胞聚集成团，难以进行形态学观测，因此每次消化时间须结合消化酶种类及浓度确定； 消化温度： 消化温