一株高锰氧化活性大肠杆菌的分离鉴定和多铜氧化酶基因-微生物学报.PDF

微生物学通报 OCT 20, 2011, 38(10): 1465−1472 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 一株高锰氧化活性大肠杆菌的分离鉴定和 多铜氧化酶基因的克隆与结构特性 1 2 1 1 2 1* 崔晓彦 张震 杨伟红 张忠明 刘凡 李林 (1. 华中农业大学 农业微生物学国家重点实验室 湖北 武汉 430070) (2. 华中农业大学 农业部亚热带农业资源与环境重点实验室 湖北 武汉 430070) 摘 要: 锰氧化物是 Mn( Ⅱ)经生物和化学氧化后形成的矿物成分, 在元素生物地球化学循环过程 中起着重要作用, 而不同种类的细菌对 Mn( Ⅱ) 的氧化作用是自然界中氧化锰矿物形成的主要成 因。从山东崅峪采集的铁锰结核棕壤中分离得到一株具有高锰氧化活性的土壤杆菌, 其对Mn( Ⅱ) 的氧化作用活性明显高于其它分离菌株, 达到65 μmol/L 。通过个体形态与培养特征观察、生理生 化反应、G+C mol% 测定和 16S rRNA 基因序列比对分析等鉴定, 确定该菌株为大肠杆菌 (Escherichia coli), 命名为MB266 。进一步对该菌株参与锰氧化作用的多铜氧化酶基因mco 进行了 克隆、序列与基因结构分析(GenBank 登录号: JF682492)。结果表明, 该基因编码的MCO 蛋白与 已报道的大肠杆菌Ⅲ型多铜氧化酶的氨基酸同源性达 99%, 而与已被深入研究的恶臭假单胞菌 (Pseudomonas putida) MnB1 菌株锰氧化酶CumA 的氨基酸序列的相似性仅有19.2%, 但MCO 与 CumA 二者的一级结构中都存在 2 个保守的铜氧化超家族, 而每个保守结构域内又都存在2 个保 守的铜离子结合位点, 且二者在二级结构上都存在多个 β-折叠片, 并形成 2 个 β-桶结构域, 这些 结构上的共性可能与它们均具有对Mn( Ⅱ) 的氧化活性有关。大肠杆菌野生菌株具有锰氧化活性这 一特性目前尚未见于文献报道。 关键词: 锰氧化作用, 大肠杆菌, 鉴定, 锰氧化基因 Isolation and identification of an Escherichia coli strain with high manganese-oxidizing activity and cloning and characterization of its multicopper oxidase gene CUI Xiao-Yan1 ZHANG Zhen2 YANG Wei-Hong1 ZHANG Zhong-Ming1 LIU Fan2 LI Lin1* (1. State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070, China) 基金项目：国家自然科学基金重点项目(No. * 通讯作者：Tel: 86-27 : lilin@ 收稿日期：2011-04-