气体检测-燕京惠泉啤酒.DOC

压缩气体微生物检测技术探讨 福建省燕京惠泉啤酒股份有限公司技术质量部 孙黎琼 在啤酒生产中，压缩气体直接接触到麦汁、啤酒。啤酒的污染，气体是主要的来源之一。因此，啤酒厂必须定期对无菌空气、氮气、二氧化碳进行检查，以提供必要的参考数据，减少污染。目前，国家没有一个统一的压缩气体检测标准，每个啤酒厂只能根据原理制定检测方法，但有的很难准确地定量检测压缩气体的含菌量。下面对几种压缩气体检测方法进行比较。 实验器材及试剂 实验器材：压缩气体取样器、环境空气取样器、压缩气体收集装置、真空抽滤系统、培养皿、φ0.22μm无菌膜片　 试剂：固体营养培养基、液体营养培养基、0.9%生理盐水 常用用的压缩气体检测方法 2．1 平板直接吹气法 将熔化的固体培养基倒入培养皿制成平板，倒置几小时去除表面水分后，将气体取样阀灭菌，缓缓放出适量气体，几秒钟后增加气体流速，打开培养皿盖，让平板培养基暴露在气体流中，并缓缓地旋转培养皿，使培养基的所有表面与气体流接触，暴露10分钟，盖上盖，直接置37℃恒温培养2天，进行菌落计数，即为10分钟气体含菌量。 2．2 气体膜过滤法 在无菌室以无菌操作方法把φ0.22μm的无菌膜片装到高温杀菌过的压缩气体取样器。将气体取样阀灭菌，缓缓地放适量气体，等气流稳定后，把取样器橡皮管接到取样口，使气体通过膜片（如图1），10分钟后，拆下取样器，在无菌操作下，把膜片取下，置固体培养基平板上，37℃恒温培养2天，进行菌落计数，即为10分钟气体含菌量。 2．3 液体培养基吹气法 将300ml液体营养培养基装入500ml带橡皮塞的广口瓶，瓶口连接一个能耐高温的橡片管（气体入口），并接一根玻璃管插到液面下，同时瓶口接一个排气口（如图2），置高温蒸汽灭菌。取样方法同气体膜过滤法，10分钟后取样结束。用止血钳夹紧进气口，直接置37℃恒温培养，观察培养基是否变混浊及时间，判断气体是否污染及污染程度。 改进的气体检测方法（真空抽滤富集法） 将300ml0.9%生理盐水装入500ml带橡皮塞的空气富集装置(如液体培养基吹气法装置),高温蒸汽灭菌后取样，方法同液体培养基吹气法（如图3）。10分钟后取样结束，用止血钳夹紧进气口，以无菌操作方法，用φ0.22μm的无菌膜片进行真空抽滤富集收集液中的微生物，把膜片置固体培养基平板上，37℃恒温培养2天，进行菌落计数，即为10分钟气体含菌量。 结果与讨论 4．1不同检测方法检测结果对比 控制相同的气体流速，取样时间相同（10分钟），用不同的方法对压缩空气进行微生物检测，同时用环境空气取样器（可以设定取样空气量）对环境空气进行微生物检测。结果如下表： 取样次数 样品名称 细菌总数（个/10分钟） 环境空气细菌总数（个/200升） 平板吹气法 气体膜滤法 液体吹气法 抽滤富集法 1 粗滤前空气 97 14 20hr混浊 36 101 2 粗滤前空气 76 6 30hr混浊 12 98 3 粗滤后空气 103 1 48hr混浊 6 122 4 粗滤后空气 52 2 52hr混浊 3 63 5 精滤后空气 64 0 不混浊 0 87 6 精滤后空气 80 0 不混浊 0 53 4．2讨论 4．2．1 从上表可以看出：同一种压缩气体，取样方法不同，检测结果相差较大。用平板直接吹气法检测，细菌总数最多；气体膜滤法检测细菌总数最少；液体吹气法不能定量计数。因为用平板直接吹气法检测，在检测过程中，受外界环境空气影响较大。在吹气中，外界环境空气形成很强的气流，把环境空气中的微生同时也带入平板中，所以检测的细菌总数会比实际气体的细菌总数高；气体膜过滤法，在取样过程中，虽然不受环境空气影响，但很多气体从排气口排掉，相应气体中的一部分微生物没有被滤在膜上，而直接被排出去的空气带走。且捕集到的微生物可能会因没有及时检测而干燥死亡，所以检测的细菌总数会比实际低。 4．2．2 平板直接吹气法检测的误差大小，跟环境空气的含菌量多少关系较大。环境空气的含菌量越高，检测的细菌总数越多，误差越大。 5 结论 5．1 平板直接吹气法，操作方便、简单，但受外界环境空气影响较大，检测结果大大偏离实际（除环境空气无菌），此方法不可取；气体膜过滤法检测结果也有误差，一般不提倡。两种检测方法检测结果都不能正确地指导生产。 5．2 在没有真空抽滤富集设备的厂家，可以采用液体培养基吹气法。虽然液体培养基吹气法检测不能定量地计数，但只要固定气体流速，固定时间，可以很快地判断压缩气体是否污染及污染程度，同样可以指导生产。 5．3抽滤富集检测法，集几种检测方法的优点，只要固定气体流速，固定时间，可以准确地对压缩气体进行定量检测，正确指导生产，同样也适应于其它压缩气体如：氮气、二氧化碳的微生物检测。是一种较理想的压缩气体检测方法。