泽泻法呢基焦磷酸合酶原核表达功能验证及其免疫检测-药学学报.PDF

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 18, 53 (9): 1571 1577 ·1571 · 泻法呢基焦磷酸合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究 # # * 晨 , 田 荣 , 谷 巍, 耿 超, 吴启南, 徐 飞, 巢建国, 刘 琪, 王小浩 (南京中医药大学药学院, 江苏 南京 2 10023) 摘要: 泽泻法呢基焦磷酸合酶 [farnesyl pyrophosphate synthase of A lisma orientale (Sam.) Juzep., AoFPPS] 是泽泻原萜烷型三萜生物合成途径中的重要限速酶之一。为进一步研究A oFPPS 基因的表达及其功能, 本研究将 前期获得的泽泻法呢基焦磷酸合酶基因 (accession No. HQ724508) 插入到原核表达载体, 构建重组表达载体 pCzn 1-AoFPPS, 转化BL21 原核宿主菌, 经诱导表达获得融合蛋白; 利用Ni 树脂亲和纯化技术对融合蛋白进行 纯化获得高纯度的重组蛋白, 并进行体外酶促反 以验证其功能, 高效液相色谱结果表明AoFPPS 能够催化法呢 基焦磷酸 (farnesyl pyrophosphate, FPP) 的合成。为进一步研究其表达规律, 将该纯化后的重组蛋白免疫新西兰 兔制备多克隆抗体, 酶联免疫吸附测定 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 检测抗体具高效价, 且 Western blot 结果显示该抗体可特异性识别AoFPPS 蛋白, 建立了AoFPPS 的快速免疫检测方法。本研究为揭示 AoFPPS 在泽泻体内的作用机制及其基因的调控与表达奠定基础, 为利用植物基因工程提高泽泻资源性活性成 分含量、改善中 材品质提供科学依据。 关键词: 泽泻; 法呢基焦磷酸合酶; 原核表达; 功能验证; 免疫检测 中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 18) 09- 1571-07 Prokaryotic expression, function verification and immunoassay activity of farnesyl pyrophosphate synthase of Al isma orientale (Sam.) Juzep. # # * ZHOU Chen , TIAN Rong , GU Wei , GENG Chao, WU Qi-nan, XU Fei, CHAO Jian-guo, LIU Qi, WANG Xiao-hao (School of Pharmacy, Nanj ing University of Chinese Medicine, Nanj ing 210023, China ) Abstract : Farnesyl pyrophosphate synthase of Alisma orientale (Sam.) Juzep. (AoFPPS) is con