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海带子包子体DNA随机扩增反应条件优化-上海海洋大学学报
第10卷第3期 上海水产大学学报 Vol.lO， No.3
友则1年9月 JOURNAL OF SHAJ�GHAI F1SHERIES UNlVE虹灯Y Sep.，如1
立章编号， 1∞4-7271(2001)旧 0193 - 06
海带子包子体DNA随机扩增反应条件优化
胡远皆，周志刚
Ct海水产大学泡业学院，上海 江口回)
摘 要z从海带炮子体的酶解单细胞中提取的基因组DNA，可用F随机扩增多在I爪A(RAPD)的重复性研究ο
通过对扩增反应体系中各国子和扩增程序的梯度实验叮确定优化反应体系为0马皿ol!L引物J知�OνL
Mi+ ，100rmoVLdNIP，l.OC Taq DNA聚合酶，30吨模板DNA;优化反应程序为94C变性2nùn，接着45个循
环包括94气C变性lmin，37飞退火lmin，72C延伸2minj最后72C延伸lOmin。 在此优化条件下得到的RAPD图
谱有较好的特异性和重复性，为海带遗传多样件种质鉴定、分子标记反辅助育种等研究提供了有用的手段。
关键词海带，袍子体，随机扩增多态DNA;基因组DNA
中图分类号回43 文献标识码 A
Optimization of random amplified reaction conditions for
Laminm也japonica (Phaeophyta) sporophyte DNA
HU Yuan-jie， ZHOU Zhì-gdIlg
( Fi;阳白白l1ege， S町，Slwnghni 氛阻剧Ch刚)
Abs伽3ct: Unicells Îso!a过from lnminaria japoni阳sporopl甲e with en叩matic d回国CIatlOn， were 田ed t.o extract
gen刷UC DNA and to study the reproclucihility of血e random 皿1plifiedpolymorphic DNA (RAPD) paltems 咀e
m，叫j，血d pn事回田 of ampl凶ed reactions were individ田且y optJmi阳t 吁le reactlOllS were compùl始d of
0.2μmolJL阳mer，1.5mmoVLM(+ ，100阳10lJL dNTP， 1 .0 U Taq DNA polymera脯，30 ng template DNA. The
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timized阴刀 were pl时enaturation at 94 t: for 2 min; and then 45 cycles containing denaturation 1 min at
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941:: .缸mealiJl唱 1 IIlÎn at 37吧，and elOl各血.on 2 mìn at 72(:;四d at last holding 10 min at 72C. The 叩timized
result in 晒tisfactory sp酬的Clty 皿d ，叩mducibility of RAPD amplification pattems， and
CO�呵uently provide a 田eful means for the re把血Ch of genetic diven;呵， molecular mar虹r
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