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基因工程 苏州农业职业技术学院 食品系生物技术教研室 Gene Engineering 基因工程发展史 Gene engineering 1968年 沃纳.阿尔伯,丹尼尔.内森和汉密尔.史密斯第一次从大肠杆菌中提取出了限制性内切酶.为此,三人共享了1978年诺贝尔生理和医学奖. 1974年 科学界肯定了在1967年由5个实验室同时发现的连接DNA片段的酶,并命名为DNA连接酶. 1973年 美国斯坦福大学科恩从大肠杆菌中取出两种带有不同基因的质粒,将两种基因经过“裁剪”,“拼接”后放入同一个质粒的大肠杆菌内,能表现出双重性.这标志着基因工程的首次胜利. 1974年 科恩将金色葡萄球菌的质粒与大肠杆菌质粒进行拼接放入大肠杆菌内,使大肠杆菌获得了对青霉素的抗药性,从而实现了外来基因性状在大肠杆菌体内的表达. 20世纪70年代,第一家遗传技术公司成立—利用基因重组技术制造蛋白质用于治疗人类的疾病. 基因工程发展史 Gene engineering 1983年 世界上第一例转基因植物在美国成功培植. 1996年 转基因作物首次进行了商业种植.迄今,全世界已有50个国家开展了转基因植物种植,品种有60多种植物.在美国转基因食品达到4000多种,已成为日常的生活用品. 2003年 为期13年的人类基因组计划(1990年10月1日启动)的人类基因组序列图绘制成功.人类基因组计划与曼哈顿原子弹计划(1942)和阿波罗登月计划(1969)一起被称为20世纪三大科学工程. 基因工程的基本内容 Gene engineering 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。       基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物 重组DNA技术流程 剪切? 剪切? 拼接? 导入? 表达? 基因操作的工具 Gene engineering 基因的剪刀——限制性内切酶（一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子） 基因的针线——DNA连接酶 基因的运输工具——运载体（如质粒、噬菌体和动植物病毒等） DNA连接酶 Gene engineering 连接的部位：磷酸二酯键（梯子的扶手），不是氢键（梯子的踏板）。 基因的运载体 Gene engineering 运载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 外源基因导入受体细胞需要运输工具—运载体。 运载体的作用： 1、作为运载工具，将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 质 粒 Gene engineering 质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 质粒能够“友好”地“借居”在宿主细胞中。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。但是，质粒的复制则只能在宿主细胞内完成。 基因操作的基本步骤 Gene engineering 提取目的基因 从供体细胞的DNA中直接分离基因（如“鸟枪法”） 人工合成基因 反转录法 化学合成法 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 三种目的基因提取方法的优缺点 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 专一性最强 化学合成法 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性强 反转录法 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 操作简便广泛使用 鸟枪法 缺 点 优 点 目的基因与运载体结合 将目的基因导