测定原理高效液相色谱仪的系统由储液器泵进样器色谱柱检测器.DOC

测定原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。 HPLC-UV使用程序 1、相色谱仪开启程序： 、打开电脑，进入系统workstation version 4.0。 、打开反控开关 分别打开检测器、泵、柱温箱、进样器的开关 更换流动相 用注射器抽气. 3）、打开borwin工作站 打开工具栏中control edit run control method建立方法（流速、温度、波长、时间等） monitor baseline选择所建立的方法 按run 4）、待基线平稳后 打开工具栏中run，如连跑两针样品以上可选择working list(0n system1),如果跑单针则选择start single run(0n system1) 根据自己的情况填写vial、runname、idnum、control、runlong、injvol几项，但要注意所填写的内容要与工具栏control中建立的方法一致，否则容易造成程序不工作或死机。 2、关闭程序：当结束实验室后，先关闭工作站的pump，使其停止工作，退出borwin工作站，然后关闭检测器、柱温箱、进样器、反控器的开关，不关闭泵的开关。 3、清洗色谱柱：先按下flow，调流速为0.5ml/min，再按下enter,然后按pump。用处理好的纯水冲柱半小时以上至柱压平稳，再用甲醇冲柱半小时以上至柱压平稳后，关闭泵。切记更换流动相时一定要先抽气，确保没有气泡进入泵中，再打开pump。 4、色谱图考取：进入windows系统我的电脑c:borwin/default中把所需图谱考到217电脑d:borwin/default中进行处理。 5、在两台色谱仪都闲置且不跑梯度的前提下，优先使用单泵色谱仪。 6、在线扫描样品的紫外吸收波长：HPLC-UV（双泵）检测器可以在线扫描样品的紫外吸收，操作如下：1）首先要知道所测样品的出峰位置，在样品要出峰前1-2min点击HSS1500monitor-system#1体统中的Uv-base,当样品峰出现一定高度时，点击Uv-spc进行扫描，图谱自动保存。2）打开路径：打开桌面上的JWEXPL32系统 spectra analysis file open c:borwin/default 所扫图谱。 7、UV检测器的特点：UV检测器是HPLC中应用最广泛的检测器，当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可见检测器。它灵敏度高，噪音低，线性范围宽，对流速和温度均不敏感，可于制备色谱。由于灵敏高，因此既使是那些光吸收小、吸光系数低的物质也可用UV检测器进行微量分析。但要注意流动相中各种溶剂的紫外吸收截止波长。如果溶剂中含有吸光杂质，则会提高背景噪音，降低灵敏度（实际是提高检测限）。此外，梯度洗脱时，还会产生漂移。 8、色谱柱：反相键合相C18 高效液相色谱仪使用注意事项 色谱柱的使用：1）、可根据自己的样品选择色谱柱，但在安装时一定要注意柱子的安装方向；2）、Diamonsil(钻石)HPLC色谱柱又高压匀浆法装填，能够承受较高压力。为获得最佳分离效果，使用时请不要超过200bar，最高操作温度不要超过60℃；3）保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要用配套的螺旋帽 样品制备：样品应尽可能溶解在与流动相互溶的溶剂中，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免样品在系统中由于溶解度降低而析出。并且样品必须使用针头式过滤器对样品预先过滤。 流动相的使用：在使用前一定要超声脱气，如流动相为纯水或缓冲盐溶液，首先要过滤，然后超声的同时使用真空泵抽气，一般超声20min。注意：过滤时，所需滤器和装滤液的瓶子一定要用虑好的滤液清洗干净；如虑缓冲盐后一定要用注射用水把所用滤器清洗干净。 流动相的选择：实验室的色谱柱一般允许流动相的pH范围为2-7.5，所以要选择适宜的流动相。 流动相的更换：每次更换流动相时，一定要关闭pump，且用注射器在泵头管处抽出大约两管的流动相，排除更换流动相时所带入得气泡，确保气泡未进入泵中。 打开pump后，一定要观察流动相进入泵时是否有气泡，如有气泡一定要关闭以防进入泵