用包埋脱水法冰冻保存小新月菱形藻-海洋科学.PDF

用包埋脱水法冰冻保存小新月菱形藻 1 2 1 3 王起华 , 李 　莹 , 刘艳萍 , 李大鹏 ( 1. 辽宁师范大学 生命科学学院 , 辽宁 大连 116029 ;2 . 辽阳职业技术学院 师范分院 ,辽宁 辽阳 111000 ; 3 . 中国科学院 海洋研究所 ,山东 青岛 26607 1) ( ) 摘要 :采用包埋脱水法研究了小新月菱形藻 N i tz schi a clos te ri um m i n utiss i m a 的超低温保 存 ,探讨了影响存活率的内、外因素 :藻细胞年龄 、脱水速率 、胶球含水量和化冻后的恢复方 法等 。结果表明 ,将处于静止初期的藻细胞包埋在含有 0 . 5 mol/ L 蔗糖的 3 %褐藻酸钙胶球 中 , 以含水量每小时减少 0 . 9 %的平均速率脱水至胶球含水量为 40 % ,化冻后在冻存管中室 温下暗恢复 12 h 的条件下冰冻存活率较高 ,可达到 18. 3 %左右 。与常规的两步法冰冻保存 相比 ,包埋脱水法可大大简化操作程序 ,是保存小新月菱形藻的一种有潜力的方法 。 ( ) ( ) 关键词 :小新月菱形藻 N i tz schi a clos te ri um m i n utiss i m a ;包埋脱水法 ; 冰冻 超低温 保存 中图分类号 :Q33 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2006) 　　海洋饵料微藻在鱼 、虾 、贝类育苗生产中有着重 1. 2 　包埋和脱水 要作用 ,有关其超低温保存的研究近年来 日益受到 1. 2 . 1 　包埋 重视[ 1～6 ] 。然而 , 以往的保存方法多采用常规的两步 取上述培养材料 , 离心除去培养液 , 用含 0 . 5 冷冻法 ,限制了该技术的广泛应用[7 ] 。20 世纪 90 年 mol/ L 蔗糖的消毒海水再悬浮至适当密度 ,与含 0 . 5 代初 ,包埋脱水法在高等植物种质的冷冻保存中得 ( mol/ L 的蔗糖和 30 ‰NaCl 的 6 %褐藻酸钠 SI GMA 以建立并广泛应用 。该法操作简单 ,不需复杂设备 , C H EM ICAL Co . ) 溶液等体积混匀 ,移入具 6 号针头 而且通常不使用抗冻保护剂 ,是对超低温保存技术 的 10 mL 注射器中 ,将藻液滴入含相同浓度的蔗糖 的一个重大发展[ 8 ] 。近年来采用该方法保存某些藻 和 NaCl 的 0 . 1 mol/ L CaCl2 溶液 中 , 轻轻摇动 , 60 类已获得初步成功[9～12 ] 。但是 ,采用该法保存海洋 min 后完成包埋过程 。控制条件可制成直径为 2 . 5 饵料微藻的研究尚鲜有报道 ,作者[ 13 ] 曾尝试用包埋