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莲初生叶发育过程显微观察 摘要：利用树脂切片技术，分析了莲初生叶不同发育时期的内部结构，发现初生叶的腹面具有乳突结构，乳突细胞下层具有结构特殊的栅栏状细胞；靠近下表皮的部分细胞特化为分泌细胞，其液泡中的分泌物质经历了先积累再消耗的变化过程。 关键词：莲；初生叶；发育；显微结构 中图分类号：S645.4文献标识码：A文章编号：1001-3547（2017）18-0108-03 莲（NelumbonuciferaGaertn.），又名莲藕、荷、水芙蓉等，是莲科莲属多年生水生植物，主要分布于我国热带、亚热带和温带淡水资源丰富的湖泊和沼泽等地区。莲的叶片又称为荷叶，其颜色青绿，气味芬芳，含有莲碱（Roemerine）、原荷叶碱（Pronuciferine）和荷叶碱（Nuciferine）等多?N生物碱及维生素，自古就是药膳中经常选用的原料。传统认为，荷叶苦平，归肝、脾、胃，具有清解暑热、升发清阳、凉血止血的作用，可以用于暑热烦渴、暑湿泄泻、便血便漏[1]。近代研究表明，荷叶有良好的降血脂、降胆固醇和减肥的作用[2～4]。 近年来，对荷叶的研究主要集中于其物质成分和药用价值方面，关于荷叶结构和发育过程的研究较少，陈维培等[5]和李长春等[6]研究认为莲的叶片有3种形式，分别为沉水叶、浮水叶和挺水叶，3种类型叶片的显微结构有不同。刁英等[7]对10份莲属植物进行了研究，认为莲属植物的叶片均有明显的栅栏组织和海绵组织之分，但细胞结构紧密度（CTR）有一定的差别。目前尚缺少关于莲叶片（荷叶）发育过程和精细结构的研究。本研究利用树脂切片结合组织化学技术，分析了莲初生叶不同发育时期的内部结构，观察了莲初生叶中特殊的栅栏状细胞和分泌细胞的发育过程，并对其功能进行了讨论。 1材料与方法 1.1试验材料 莲野生品种微山红莲种植于山东省农业科学院饮马泉试验基地水泥池中，于2016年秋季采收成熟的莲籽。将莲籽破壳后浸泡于4～5cm深的清水中，置于28℃的培养箱中，16h光照、8h黑暗培养。取吸涨后2、4、6、8d的初生叶（第一片真叶）为材料。 1.2试验方法 ①试剂a.戊二醛固定液。2.5%戊二醛溶液，用0.1mol/L的磷酸缓冲液（pH值6.8）配制。 b.番红染色液。1g番红溶于10%乙醇，加入 4mL苯胺油，用10%乙醇定容至100mL，50℃加热溶解，冷却至室温后用滤纸过滤。 c.改良甲苯胺蓝染色液。称取0.5g甲苯胺蓝，加入100mL30%的乙醇，加热至65℃，搅拌 30min，滤纸过滤后避光保存。 ②制片与染色树脂切片方法参照Wei等[13]的方法，将莲藕叶片切成边长1mm的小块，经脱水、树脂包埋后获得3μm厚的切片。将粘附有树脂切片的载玻片浸入番红染色液中染色6h，自来水冲洗，蒸馏水浸洗2次，每次3min；再浸入甲苯胺蓝染色液中，染色10min，自来水冲洗，蒸馏水浸洗2次，每次5min，35℃烘干。中性树胶封片，镜检拍照。 2结果与分析 2.1莲初生叶发育过程 莲籽吸涨后2d，初生叶开始突出果皮，叶柄为弯曲状态；吸涨后4d，初生叶及叶柄伸出果皮5～10cm，叶片为卷曲状态；吸涨后6d，叶柄伸出果皮10～20cm，叶片仍为卷曲状态。吸涨后8d，初生叶展开，直径4～5cm。 2.2莲初生叶发育过程显微结构 在显微镜下观察吸涨后2d的初生叶横切面，可以看到腹面的第一层细胞高度约为15μm，表面已经发育出小乳突。第二层细胞截面呈较规则的正方形，这层细胞之下有2～3层排列较为紧密的叶肉细胞，形状呈不太规则的多边形，之后的4～6层细胞具有比较明显的海绵组织特征，细胞间形成10～20μm的空隙；初生叶背面的2层细胞形状规则，叶片背面无乳突（图1A）。 吸涨后4d，叶片腹面第1层乳突细胞的高度达到约20μm；第2层细胞细胞质浓厚，细胞核位于细胞中央，细胞内未见明显的淀粉粒。叶肉细胞体积增大，内部可见较多的淀粉粒，小液泡开始融合。海绵组织间的空隙扩大到50μm以上。靠近下表皮的一层叶肉细胞中，有大约一半细胞开始在液泡内部积累染色较深的分泌物质，特化为分泌细胞（图1B、E，图2A）。 吸涨后6d，腹面的第2层细胞伸长为短棒状，液泡位于细胞两端，细胞核位于细胞中央，这层细胞排列紧密、形似栅栏，由于细胞质浓厚被染成深蓝色。叶片内部的叶肉细胞形成中央大液泡。分泌细胞液泡中的分泌物质累积呈液滴状（图1C、F，图2B）。 吸涨后8d，初生叶完全展开，腹面的乳突细胞膨大呈水滴状。腹面第2层细胞的细胞核仍位于细胞中央，并且含有较浓厚的细胞质。叶肉细胞被大液泡充满，细胞质和细胞核被推挤到细胞边缘。分泌细胞液泡中染色较深的物质基本消失，叶片表现为成熟叶片的结构（图1D、G，图2C）。 3讨论与结论 有研究认为，莲有3种类型的叶片，分别为沉水叶、浮水叶和挺水叶[5，6]，但我们在对