微生物--遗传与变异2.pptVIP

第二节 基因突变和诱变育种 1、自发性 各种性状的突变，可在无人 为的诱变因素处理下自发地产生。 2、不对应性 突变的性状与引起突变的原 因间无直接的对应关系。 1. 抗性突变株的筛选 （1）抗终代谢物结构类似物的突变株 用途：筛选相应代谢物的高产菌株 （2）抗药性突变株 用途：筛选相应药物(抗生素) 的高产菌株或遗传标记制作 筛选的方法--- 梯度平板法 a. 不含维生素的酪素水解液或氨基酸混合液 b. 维生素混合液 c. 0.1%碱水解酵母核酸液 以氨基酸缺陷为例进行说明 将18种氨基酸按右表分为6组 特点：每2组只有一种共同物质 （3）营养缺陷型的用途 生产菌 (氨基酸、核苷酸、维生素等高产菌需求) 研究代谢途径和杂交、转化等遗传规律的遗传标记 本节小结 1、表型变化的突变性 2、基因突变的分子基础 3、DNA的损伤的修复 4、诱变育种 （六）紫外线对DNA的损伤及其修复 嘧啶（敏感性）＞嘌呤 紫外线（ultraviolet ray，U.V.） 嘧啶二聚体（TT，TC，CC）和水合物 把经UV照射后的微生物立即暴露于可见光下时，可明显降低其死亡率的现象，称为光复活作用。 1. 光复活作用（photoreactivation，photorestoration） 最早是A. Kelner（1949）在Streptomyces griseus（灰色链霉菌）中发现的。后来，在许多微生物中都得到了证实。 2.切除修复（excision repair） 是活细胞内一种用于修复被UV等诱变剂（包括烷化剂、X射线和γ射线等）损伤后DNA的修复方式之一，又称暗修复（dark repair），通过酶切作用去除嘧啶二聚体，随后重新合成一段正常DNA链的核酸修复方式。 二、突变与育种 （一）自发突变与育种 （breeding by spontaneous mutation） 1. 从生产中育种 在生产第一线易获得较优良的生产菌株。 2. 定向培育优良菌株 定向培育是一种利用微生物自发突变，并采用特定的选择条件，通过对微生物群体不断移植以选育出较优良菌株的古老方法。 卡介苗（牛型结核分枝杆菌）的培育，花了13年 （二）诱变育种（breeding by induced mutation） 诱变育种是指利用物理、化学等诱变剂处理均匀而分散的微生物细胞群，在促进其突变率显著提高的基础上，采用简便、快速和高效的筛选方法，从中挑选出少数符合育种目的的突变株，以供科学实验或生产实践使用。 筛选 诱变 诱变育种 定向的——更重要 随机的 可获得供工业和实验室应用的各种菌株； 提高有用代谢产物的产量； 减少杂质、提高产品质量、扩大品种和简化工艺等。 诱变育种具有重大的实践意义 诱变育种的特点 （1）提高突变率，扩大突变谱 （2）有效地改良个别、单一性状 （3）缩短育种年限 （4）定向变异和有益突变的频率低 诱变育种的工作程序 1 活化菌种 2 前培养 对数期 3 菌悬液制备 1*108个/ml 4 紫外照射 暗室中操作 5 后培养 （防止诱变后延迟现象） 6 稀释涂布 诱变育种的基本原则： （1）选择简便有效的诱变剂 （2） 挑选优良的出发菌株 （3）处理单细胞或单孢子悬液 （4） 选用最适的诱变剂量 （5）充分利用复合处理的协同效应 （6）利用和创造形态、生理与产量间的相关指标 （7）设计高效筛选方案 （8）创造新型筛选方法 诱变育种应注意的几个问题 1. 诱变剂的选择（高效，简便） 物理诱变剂：频度低、大损伤，难修复，且操作简便； 化学诱变剂：频度高，点突变，易回复突变，操作麻烦。 ( NTG（亚硝基胍）——超诱变剂） UV是最常用的一种诱变剂 2. 诱变因素剂量的选择 突变率随剂量的增加而提高，但到达一定程度后，再提高剂量, 反而会使突变率下降。 正变较多出现在偏低剂量中，而负变较多出现在偏高剂量中。 UV的剂量: 固定UV功率和照射距离,以照射时间长短来确定剂量多少。（致死率：70-80%） 最适剂量：在提高突变率的基础上，既能扩大变异幅度， 又能使变异向正突变范围移动的剂量。 3. 出发菌株的选择 出发菌株： 指用于诱变育种的起始菌株 出发菌株的选择标准： 具有有利性状（如高产、生长速度快、营养要求粗放、标记明显等）； 对诱变剂敏感 突变体选择和检出 敏感菌苔 抗性菌落 加入含异烟肼的上层 加入不含异烟