生产中常用菌种的分离、选育和保藏.pdf

生产中常用菌种的分离、选育和 保藏 主讲人讲人：韩北忠韩北忠 刘 萍 带图象分析系统的微生物菌种带图象分析系统的微生物菌种 显微观察装置 第一节 菌种的分离简介 一、菌种的来源 • 根据资料直接向有科研单位根据资料直接向有科研单位、、高等院校高等院校、、工厂工厂 或菌种保藏部门索取或购买； •• 从大自然中分离筛选新的微生物菌种从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 二二、分离思路分离思路 • 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照 生产的要求生产的要求、、菌种的特性菌种的特性，，采用各种筛选方法采用各种筛选方法，， 快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 •• 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必也必 须重新进行分离纯化。 • 有了优良的菌种有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合还要有合适的工艺条件和合 理先进的设备与之配合。 三三、新种分离与筛选的步骤新种分离与筛选的步骤 • 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生 长培养特性。 • 采样：有针对性地采集样品。 • 增殖增殖：：人为地通过控制养分或培条件人为地通过控制养分或培条件，，使所需使所需 菌种增殖培养后，在数量上占优势。 • 分离分离：：利用分离技术得到纯种利用分离技术得到纯种。 • 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性 包括形态包括形态、、培养特征培养特征、、营养要求营养要求、、生理生化特生理生化特 性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温 度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工 艺等艺等。 （一）采样 1、采样对象 以采集土壤为主。一般园田土和耕作 过的沼泽土中过的沼泽土中，，以细菌和放线菌为主以细菌和放线菌为主，， 富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵 母和霉菌较多母和霉菌较多，如如一些野果生长区和果些野果生长区和果 园内。采样的对象也可以是植物，腐败 物品物品，某些水域等某些水域等。 从自然界筛选从自然界筛选 • 2、采样季节采样季节：以以温度度适中中，雨量不多的秋初为好雨量不多的秋初为好。 • 3、采土方式：在选好适当地点后，用小萨子除去 表土表土，，取离地面取离地面55-1515cmcm处的土约处的土约1010gg ，，盛入清洁的盛入清洁的 牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时 间间、、地点地点、、环境条件等环境条件等，，以备查考以备查考。。为了使土样为了使土样 中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步 分批寄回分批寄回，，以便及时分离以便及时分离。。 （（二二））增殖培养增殖培养 • 为了容易分离到所需的菌种为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生物让无关的微生物 至少是在数量上不要增加，可以通过配制选择性 培养基培养基，选择选择一定的培养条件来控制定的培养条件来控制。 • 例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维 素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那 么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长， 而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段 的纯种分离就会顺利得多。 （三）培养分离 • 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微 生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。 在这—步，增殖培养的选择性控制条件还应进 一步应用，而且控制得细一点，好一点。纯种 分离的方法有划线分离法、稀释分离法。 （四）筛 选 • 这一步是采用与生产相近的培养基和培养条 件件，通过三角瓶的容量进行小型发酵试验通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，以以 求得适合于工业生产用菌种。 （