胰高血糖素样肽-中国细胞生物学学报.PDF

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胰高血糖素样肽-中国细胞生物学学报

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2015, 37(8): 1095–1101 DOI: 10.11844/cjcb.2015.08.0123 胰高血糖素样肽-1类似物活性检测的 CHO细胞模型构建 1 2 2 2* 钱 凯 蔡燕飞 陈 蕴 金 坚 1 2 ( 江南大学生物工程学院, 无锡 214122; 江南大学药学院, 无锡 214122) 报 摘要 该文构建了一种胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)类似物活性检测的 细胞模型, 为GLP-1类似物的药物筛选提供了一种简单可靠的评价方法。真核表达质粒pcDNA3.1/ hGLP-1R转染至中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary, CHO), 经单克隆筛选和遗传霉素(G418) 压力筛选最终筛选出6株单克隆菌株。流式细胞仪检测GLP-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor, 学 GLP-1R)的表达量, 最终筛选获得1株高表达的细胞模型(CHO/pcDNA3.1/hGLP-1R)。RT-PCR结果 显示, 该细胞模型转录hGLP-1R基因; 流式细胞仪检测结果和激光共聚焦结果显示, 细胞模型的膜 表面有hGLP-1R蛋白的表达。连续传代10次, 细胞膜表面的hGLP-1R蛋白表达没有变化。构建的 细胞模型活性检测结果显示, 该细胞模型可以很好地用于GLP-1类似物的活性检测。综上所述, 该 学 细胞模型为GLP-1类似物的活性检测建立了一种方便可靠的体外活性检测方法。 关键词 胰高血糖素样肽-1受体; 中国仓鼠卵巢细胞; 活性测定; 细胞模型 物 Constructed CHO Cell Model to Detect the Activity of Glucagon-like Peptide-1 Analogues 1 2 2 2 * Qian Kai , Cai Yanfei , Chen Yun , Jin Jian 生 1 2 ( School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China; School of Pharmaceutical Sciences, Jiangnan University, Wuxi 214122, China) Abstract The in vitro activity of glucagon-like peptide-1 (GLP-1) analogue was detected in cell which stim- ulated the glucagon-like peptide-1 receptor (GLP-1R). We constructed the cell model in Chinese

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