高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究.docVIP

高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究 引言 石油、化工、煤气、焦化及酚类等生产厂排放的废水当中含 有大量的苯酚［1］。未经净化的含酚废水可导致水源被污染，致 =J使鱼类死亡，危害农作物，最终威胁人类的健康。许多国家将苯 酚列为重要的污染物之一。目前，国内外处理含酚废水的方法主 要有物理法、化学法、微生物法及各种结合法［2］。其中微生物 法主要利用微生物的代谢活动去除废水中的有毒物，处理方法无 =J 2次污染且安全、经济。目前，已鉴定具有降解苯酚能力的微生 物主要有假单胞菌(Pseudonomonas. sp ) ［3］、芽抱杆菌 (Bacillus. sp) [4]、酵母菌(Yeast trichosporon) [5]、根 瘤菌(Rhizobia) [6]、醋酸钙不动杆菌(A. calcoaceticus) ［7］等，降酚菌株多存在于酚类污染物企业排放的废水、污泥和 被废水污染的土壤中［8］。本课题拟从被苯酚废水污染的污泥中 进行菌株筛选，得到耐酚菌后在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养 上筛选降酚菌株，进一步测定苯酚降解的影响因素。对特定菌株 降解含酚废水的应用价值进行研究。 1实验材料和方法 1. 1菌株来源 采集原黑龙江省佳木斯东郊黑龙农药化工集团废弃排污口 处污泥进行菌株筛选。 1.2培养基 基础培养基：NaCl 5. Og/L,蛋白腺10g/L,琼脂15?20g/L, 酵母浸膏5. Og/L,调节pH为7.0。 以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基：CaC12 0.1 g/L , FeS04. 7H20 0. 01 g/L, K2HP04 0. 5g/L, MnS04. 7H20 0. 05 g/L, NaCl 0.2 g/L, KH2P04 0. 5g/L, MgS04. H20 0.01 g/L, NH4N03 1.0 g/L苯酚按实验需要量添加，调节pH为7.0 [8]o 富集培养基:葡萄糖10. Og/L,营养琼脂33. Og/L,酵母浸 粉 10. Og/L,调节 pH 为 7. 5。 1.3研究内容与方法 1.3.1菌株和的驯化和分离 在超净工作台中，将10mL含0. lg/L苯酚的基础培养基倒入 培养皿，取10 g污泥加90mL蒸惚水搅拌15min,静置5min后 取上层清液为菌原液[8]。取lmL菌原液加入无菌水中分别制成 100、10- K 10- 2、10- 3、10-4等梯度的菌液，然后分别从 各菌液试管中取lmL用涂布法接种于基础培养基平板上。在pH 值为7、25°C情况下培养24?48h。挑取单一菌落于富集培养基 平板上划线、扩繁。编号，将平板置于25°C的恒温培养箱中培 养24?48h后放于4°C冰箱保存。依据革兰氏染色进行微生物鉴 定。 1.3.2降酚菌的筛选 将0D （吸光度）为600的单一菌株，按20% （体积分数）的 接种量接入无机盐培养基中，筛选同一时间内对苯酚降解能力最 强的作为优势菌株。 1.3.3培养温度对菌株降酚能力的影响 在pH值为7时，蘸取适量的菌液涂布培养与生化培养箱中 调节温度分别为20°C、25°C、30°C、35°C、40°C。24h后测定苯 酚浓度计算苯酚降解率。 1.3.4培养pH值对菌株降酚能力的影响 将菌液以20%的量接种于苯酚浓度为1000mg/L的无机盐培 养基中，培养条件为28°C、270 r/min,调节pH值为5.0、6.0、 7.0、8.0和9.0,研究pH值对菌株降酚能力的影响。24h后测 定苯酚浓度并计算苯酚降解率。 1.3.5底物浓度对菌株降酚能力的影响 将菌液以20%的量分别接种于苯酚浓度为0. 1、0. 5、1. 0、 1.5、2. 2g/L的富集培养基中，培养条件为270 r/min 28°C、 pH值7,比较菌株在苯酚浓度不同时对苯酚降解率的影响，24 h 后测定苯酚浓度并计算苯酚降解率[9] o 1.3.6接种量对菌株降酚能力的影响 设置菌株接种量分别为5%、10% 15%、20%、25%、30%, 株培养条件为pH值为7、270r/min、28°C、底物浓度为1000mg/L. 装液量50mL, 24h后测定苯酚浓度并计算苯酚降解率。 1-4分析测定方法 分析温度、接种量.pH值及底物浓度等因素对该苯酚降解 菌降解性能的影响。采用4-氨基安替毗林分光光度法测量苯酚 浓度。苯酚的降解率由式（1）计算[10] O 降解率（％） = （1-处理后体系中苯酚浓度/体系中苯酚浓 度）X100% （1） 2结果与讨论 2.1降解菌的初步鉴定 对得到苯酚降解菌株进行初步鉴定，并分别命名为BF-1、 BF-2、BF-3、BF-4、BF-5、BF-6,其中BF-2菌株生长速度最快 在培养基上直径达到89. lmm （平板直径90mm）, BF-4