甲状腺癌NIS基因治疗及维甲酸诱导分化的研究-核医学专业论文.docxVIP

t海籀二隈科夫学德，t学位论文发生再分化，羧复肿癔缨腿豁滚镄功麓。 t海籀二隈科夫学德，t学位论文 发生再分化，羧复肿癔缨腿豁滚镄功麓。 秘时，零磷究爨点通过誊缝含NIS基因鼹杼状病毒(Bac—NIS)感染翠状 腺癌细胞系，探讨感染的肿瘤细施是否具有摄驳““I功熊和搿氯酸盐抑制的特性 以及”‘I对感染的肿瘤细胞杀伤的可行性，为NIS基因介导的失分化甲状腺癌的 靶向基因治疗提供依据。此外，为了进一步探讨熏组NIS杆状病毒能否感染非甲 状腺肿瘸细胞及其裸鼠移植瘤，并对其介导的”‘I治疗进行体内外的实验研究， 以便进一步扩大NIS基因介导的胖瘤鞴内”‘l治疗的范围。 本罨琴究最先逶过夔缝NIS基嚣豹黥捆关瘸毒的《餐，并感染学状豫瘗缬慰， 探讨该制备方法{乍为萋因酒疗载{搴黪有效性，为NIS介导攀状腺癌麴糕囱放射治 疗遴行初步的探豢。 另外，进行全反式维甲酸(ATRA)诱导分化治疗甲状腺瘸的实验研究以及临床 研究，对其诱导分化的指标进行评价，为ATRA诱导分化治疗甲状腺癌进i亍初步 的探索。 材料和方法构建誊|：状病毒载体质粒(pFBNIS)，并按照Bac．to。Bac杼状瘸 毒表达系统操作手艇避行重缝瓣鹣杼状病毒(Bac—NIS)的制餐。体钤感染攀 状腺癌缨魏系FTC+133(羝分纯滤遗状癌)、8505C(未分化癌)及CGTHW3(W3) (乳头状瘸)，以及非甲状脓肿瘤细胞HepG2(肝细胞癌)、A549(肺癌)及S*Wtl6 (结麟癌)；感染的肿瘤细胞分剜通过免疫荧光检测其NIS蛋白的表达，井通过 动态掇碘实验及NaCl0。掇碘抑制实验进一步验证表达的NIS蛋白的功能和特 性；邋过细胞的克隆形成实验刹察131l对感染肼·瘤细胞的杀伤作用。并通过重组 GFP(绿色荧光鲎自)秆状瘸毒(Bac．GFP)对甲状腺癌和非甲状腺癌细飚的感染效 率，以及丁酸镳对感染效率的影魄进行了戏察。 并遴过皮下接释A549脖瘸缨照，建立稽瘤探鼠动物模型；巍察Bac．GFP 对接种肿瘸豹体内感染效率；道过Bac—NIS联阁丁酸钠感染肿瘤后，避行蒲瘤 裸鼠¨2I照像、肿瘸及各脏器”8I放射性分布的测定以及NIS介导的肿瘸“”I治 疗的初步实验研究。 构建腺相关病毒载体质粒(pGANIS)并采用磷酸钙沉淀法制备黄组NIS腺相 关病毒(rAAV—NIS)，体外感染FTC一133、8505C及HepG2。感染的肿瘸缭胞分剐 通过免疫荧光稔测其NIS爨自的表达，并通过动态舞缕实验及NaG]岛摄珙I捺镑l {：海铭二医辩大学媾}j学位论曼实验进一步验证表达的NIS蛋白的功能和特性。 {：海铭二医辩大学媾}j学位论曼 实验进一步验证表达的NIS蛋白的功能和特性。 贯终，本研究透过全反式维甲酸(ATRA)诱学甲状鼹癣缨照系FTC-133、8505C 及CGTHW3后，经Rt。PCR及Western blot检测甲状腺癌细胞系的NIS mRNA及其 蛋白的表达，并测定甲状腺癌细胞系诱导2周后的摄碘变化。并对15例失分化 甲状腺癌病人进行了ATRA诱导分化治疗的晒床研究，每天翻服ATRA剂量为l～ i．5mg／kg，平均剂量为1．08±0．19mg／kg，持续治疗时间30d或60d，测定ATRA 治疗裔{f后转移灶麓摄碘变化以及转移灶大小及巍清零g燕，并进行比较。 结果成功构建了重组NIS基因的杆状病毒，受CMV(巨细胞病毒)极早期基 因启动子调控；体外感染甲状腺癌细胞和菲甲状腺瘗缨越表明，感染细照表达的 NIS餐白位予细胞膜上，且具有摄碘的功能和高氯酸钠抑制的特性，其中Bac-NTS 感染细胞的摄碘率最高，达未感染细胞的2l倍；Bac-NIS感染的肿瘤细胞可被 ”‘{有效地杀伤。通过Bac—GFP感染肿瘤细胞表明，抒状病毒对不圊辩癌细胞系 的感染效率彳：嘲，丁酸钠能够明显提高肿瘤细胞的感染率。其巾FTC-133和8505C 各不加’r酸钠醵落况F，感染率最高；8505C秘A549的感染率最低。 初步动物实验研究表明，Bac-NIS能够感染裸鼠接种的A549月l|J痛，联崩丁 酸钠感染的肿瘸摄碘增高。由于肿瘤内”4I排出较快，实验。“I治疗来见肿瘤缭 小。 邈组NIs腺相关病毒(rAAV—NZS)也能够感染FTC一133、8505C及HepG2细胞 橡，显表达的NIS蛋白位予艟癯缨魈膜上；表达的NIS蛋白具有摄磁的功能和离 氯酸钠抑制的特性。但纯化的rAAV-NIS滴度太低。 ATRA诱导帮状腺癌绥臌系FTC一133、W3和8505C 48h后，FTC～133和鞭3殴 NfS mRNA及蛋臼表达增高，8505C未见变化；ATRA诱导2周后，FTC一