甲型副伤寒沙门菌特异性蛋白筛选-生物医学工程专业论文.docxVIP

本研究得到： 本研究得到： 国家科技支撑计划课题《重要病原微生物检测方法的研 究》的支持。 (课题编号：2008BAl56801) 长春理工大学硕士学位论文原刨性声明本人郑重声明：所呈交的硕士学位论文，《甲型副伤寒沙门菌特异性蛋白筛选》是 长春理工大学硕士学位论文原刨性声明 本人郑重声明：所呈交的硕士学位论文，《甲型副伤寒沙门菌特异性蛋白筛选》是 本几在指导教师的指导下．独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的 内容外，本论文不包禽任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的 研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识副本声 明的法律结果由本人承担。 作者签名： 亘地 垫!!年—土目!兰I目 长春理工大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解“长春璀工大学硕士、博士学位论文版权使 用规定”，同意长春理工大学垛留井向中幽科学信息研究所、中崮优秀博硕士学位论文 全文数据库和CNKI系列数据库及其它同家有关部门或机构送文学位论文的复印件和 电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权长春理工大学口r以将本学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索，也可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇 编学位论文。 作者签名： 匦塑 兰盟L年—L月』翌日 导师签名： ±煎坚 2011年3月12目 摘 摘 要 目的在引起伤寒、副伤寒的病原中，甲型副伤寒沙门菌所占的比例逐渐升高c 我国每年均有不同程度的地方性甲型副伤寒流行及暴发。针对甲型副伤寒沙门菌引起 的感染．通常采用全血细菌分离培养，耗时较长，且分离率较低，难以满足临床或突 发公共卫生事件快速诊断及鉴别诊断的需要，加之目前已有血清学诊断方法的特异性 较差、敏感性较低，使研宄发展快速检测甲型副伤寒沙门菌感染的技术及方法成为必 需。另外．由于现在还没有针对甲型副伤寒沙门菌的疫苗．所以迫切需要甲型副伤寒 沙门菌快速检测的方法和能刺激机体免疫系统产生抗体的抗原蛋白。本研究旨在筛选 甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白中具有免疫原性的蛋白抗原．用于甲型副伤寒沙门菌的早 期诊断：同时筛选出具有良好免疫保护性的蛋白，作为候选疫苗的靶标。方法提取8 株临床分离的甲型副伤寒沙门菌的外膜蛋白．利用双向电泳进行分离t转移至PVDF 膜上，与病人的血清进行蛋白印迹杂交筛选、鉴定出有强免疫性的蛋白质。并利用 pET24b、pET30a和pET5】b三种载体，将筛选得到的蛋白在原核系统中进行表达、纯 化后，用病人血清进行蛋白印迹杂交，验证蛋白的免疫性。结果筛选到了20个具有 免疫性的蛋白点，经MALDI．TOF．MS鉴定，代表了7种蛋白，分别为早期蛋白OrapX、 TolC、SdhB和MetQ，恢复期蛋白OmpA、AcrA和LldD蛋白质。7个蛋白均能在BL21 (DE3)中大量表达。用47份甲型副伤寒病人血清与7个纯化后的抗原进行杂交，其 中47份(100％)能与LIdD、AcrA、SdhB杂交，46份(97 87)能与OmpA、OmpX 杂交，45份(95 47)能与TolC杂交，37份(78 72％)能与MetQ杂交。结论本研 究从甲型副伤寒沙门菌中筛选到了7个抗原蛋白，包括OmpA、AcrA、LIdD、OrnpX、 ToIC、SdhB和MetQ．并在体外获得了大量表达，纯化后用病人血清验证了其免疫反 应性，有潜力成为早期诊断、药物及疫苗的靶位。 关键词 甲型副伤寒沙门菌，免疫蛋白质组学，外膜蛋白 ABSTRACTThe ABSTRACT The incidence of Salmonella enteriea serotype paratyphi A infection in human is becoming hi曲er than other pathogens causing typhoid fever and parat),phi fever in man) areas in China Several outbreaks caused by endemic S Paratyhpi A occurred in SOnle regions ex’ery),ear Several strategies involving whole blood culture and isolation were applied to detect the infection caused bj S Paratyphi A It is difficult to meet the demand of rapid diagnosis and distinguishable diagmosis in clinical or public health emergencies