三株霍乱弧菌16s.PDFVIP

维普资讯 宣 堂塑壁 兰苤查 生 旦箜 鲞箜2期 ChinJGastroHepa，Apr2004，Vo1．13，N。．2 三株霍乱弧菌 16srDNA指纹 图谱分析 吕 涛 谢 婧 段广才 郗 园林 范清堂 【摘要 】 目的 探讨我国新疆分离 O139群霍乱弧菌的基因组特征。方法 自行设计引物 ，利用 PCR掺人法用地 高辛标记的 16srDNA基因探针，分别对二株 VCO139霍乱弧菌 (新疆分离株 XJ93006、国际标准株 M045)及一株 ElTor菌株 (新疆分离株 89079)的 基因组 DNA的 BSlI、PvuI酶切产物进行 southern杂交 。结果 杂交结果显示此三株霍乱的杂交图谱均不同。结论 我国新疆的 O139霍乱既不 同于本地 的ElTor霍乱 ，也与 国际标准株存在差异 。 【关键词】 霍乱弧菌 ；16srDNA基因探针 16srDNA fingerprintanalysisofthreevibriocholeraestrains LU Tao，XIEJing，DUAN Guangcai，etal CollegeofpublicHealth，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052，China 【Abstract】 Objective ExplorethegenomiccharacterizationofvibriocholeraewhichwereisolatedfromXinjiangChi— na．Methods DesignedPCR primersand labeled 16srDNA geneprobewith mixing DG一11-dUTP intothe PCR system ．La— beled16srDNAgeneprobehybridizedthetwoO139strains(isolatedfromXinjiangstrainXJ93006，standardstrainMO45) nadanE1Torstrain(isolatedfromXinjiangstrainxj89079)DNAwhichweredigestedbyenzymeBglIandP、ruIseparately． Results Theresultofthehybridzation indicated difference inallthreevibriocholeraestrains．Conclusion 0139 strainin Xinjinagisdifferent thM045nadE1Tor89079strain． 【Keywords】 Vibriocholeme；16srDNAgeneprobe 在霍乱分子流行病研究中，16srDNA基因探针应 4．探 针制 备：以 E1Tor89079霍乱 弧菌基因组 用较为广泛 。设计引物 以地高辛为标记用 PCR法合 DNA为模板 ，用 PCR方法扩增 16SrDNA片段 ，对扩增 成 16srDNA基 因探针 ，对三株霍乱弧菌基 因组 DNA的 产物用 VITAGENE凝胶 回收试 剂盒 进行纯化 回收 。 酶切产物进行杂交 。 用 EcoRI和 SalI双酶切质粒和 16srDNAPCR产物 ，对 酶切产物进行 回收 。以质粒 ：16srDNA=1：3的摩尔 比 材料与方法 用 T4连接酶 16℃过夜连接 。转化感 受态大肠杆 菌 1．菌株和质粒来源 ：MO45、XJ89079、XJ93006三株 TB1，通过蓝 白筛选挑选阳性菌落，提取质粒鉴定。用 霍乱弧菌