间日疟原虫感染免疫应答特征的研究-病原生物学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 5 间日疟原虫感染免疫应答特征的研究 摘 要 目的：（1）了解间日疟原虫现症感染者外周血细胞免疫表型变化特征；（2）观察 间日疟原虫抗原诱导的间日疟原虫现症感染者 PBMC 的增殖和凋亡；（3）了解 IFN-γ、TGF-β1 在间日疟原虫感染免疫中的作用；（4）探讨间日疟原虫感染引起 的抗间日疟原虫粗制抗原（P.vAg）、抗 P.vMSP-1（19）、抗 P.vAMA-1、抗恶性疟 原虫粗制抗原（P.fAg）、及抗正常红细胞膜抗原（NRBCAg）IgG 抗体水平变化特 征。 方法：（1）用流式细胞仪检测 44 例间日疟原虫现症感染者（AC 组）、18 例既往 感染者（IC 组）、24 例正常对照（NC 组）外周血 CD3+CD4+T 细胞、CD3+CD8+T 细胞、 γδT 细胞、 B 细 胞 、 NK 细 胞 、 NKT 细 胞 、 CD4+ 记忆性 T 细胞 （CD4+CD45RO+T），早期 CD4+记忆性 T 细胞（CD4+CD45RO+CD27+T），CD8+T 记 忆 性 细 胞 （ CD8+CD45RO+T ）， 早 期 CD8+ 记 忆 性 T 细 胞 （CD8+CD45RO+CD27+T），CD4+CD25+ T 细胞及其表达 FoxP3 细胞的百分含量； （2）利用 3H-TdR 掺入法观察 5 例间日疟原虫现症感染者 PBMC 在间日疟发病 时（week0）、发病后第 1 周（week1）、发病后第 2 周（week2）与 P.vAg、P.fAg 、 NRBCAg 及 OKT3 共培养时增殖活性的动态变化；（3）用 Annexin-V-FITC 与 CD3-APC、CD4-PECy5.5、CD8-PE、CD19-PECy5.5 单克隆抗体联合使用测定 7 例疟原虫现症感染者 PBMC 与 PvAg 和 NRBCAg 共培养时 CD3+CD4+T 细胞、 CD3+CD8+T 细胞及 B 细胞凋亡的百分率；（4）用 ELISA 法检测 30 例间日疟原 虫现症感染者及 15 例正常对照血浆 IFN-γ、TGF-β1 水平，同时检测 12 例间日 疟原虫现症感染者及 6 例正常对照人群 PBMC 与 P.vAg、NRBCAg 及 OKT3 共培 养时上清中 IFN-γ、TGF-β1 水平。此外，观察了 5 例间日疟原虫现症感染者 PBMC 在 week0、week1、week2 与 P.vAg、P.fAg 、NRBCAg 及 OKT3 共培养时上清中 IFN-γ、 TGF-β1 水平；（5）采用 ELISA 法测定 77 例疟原虫现症感染者、32 例既往感染 者、20 例正常人群血浆抗 P.vAg、抗 P.vMSP-1（19）、抗 P.vAMA-1、抗 P.fAg、及 抗 NRBCAgIgG 抗体水平。 结果：（1）AC 组、IC 组及 NC 组外周血细胞免疫表型：AC 组 NK、NKT 及 CD8+T 细胞百分含量（分别为 9.87%、3.11%及 24.46%）明显低于 IC 组（16.70%、4.68% 及 28.92%）及 NC 组（14.37%、4.43%及 30.77%）（P 均＜0.05）；但 AC 组 γδT、 CD4+记忆性 T、CD8+记忆性 T 及 CD4+CD25+ T 细胞百分含量（4.79%、25.13%、 18.52%及 4.83%）明显高于 IC 组（3.04%、20.00%、13.48%及 3.16%）及 NC 组 （3.29%、16.60%、13.27%及 2.41%）（P 均＜0.05）；AC 组早期 CD4+记忆性 T 及早期 CD8+记忆性 T 细胞百分含量（77.85%及 79.67%）亦明显高于 NC 组 （63.60%及 59.46%）（P 均＜0.05）；AC 组 CD4+T 细胞、CD4+CD25+FoxP3+T 细 胞与 B 细胞的百分含量与 IC 组及 NC 组相比，差异无显著性（P 均＞0.05）； （2）间日疟原虫现症感染者 PBMC 体外增殖的动态变化：AC 组 P.vAg 刺激孔 PBMC 在发病时的 CPM 值明显高于发病后 1 周及发病后 2 周（P 均＜0.05），且 在发病时和在发病后 2 周，AC 组 P.vAg 刺激孔的 CPM 值明显高于 NRBCAg 刺激 孔及 P.fAg 刺激孔（P 均＜0.05）；而在发病后 1 周，AC 组 P.vAg 刺激孔的 CPM 值 与 NRBCAg 刺激孔及 P.fAg 刺激孔之间差异无显著性（P 均＞0.05）；（3）间日疟 原 虫 现 症 感 染 者 PBMC 细 胞 亚 群 的 凋 亡 ： 间日 疟 原 虫 现 症 感 染