间日疟原虫疫苗候选分子PvMSP1对树突状细胞分化成熟和功能的影响-病原生物学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 1 间日疟原虫疫苗候选分子 PvMSP1 对 树突状细胞分化成熟和功能的影响 中文摘要 目的：（1）观察间日疟原虫疫苗候选分子 PvMSP1（Plasmodiumvivax merozoite surface protein1）对树突状细胞（dendritic cell, DC）分化成熟和功能的影响；（2） 探讨 PvMSP1 通过 TLR（Toll Like Receptors）通路活化 DC 的作用。 方法：（1）将重组表达质粒 PET28a-PvMSP1 转化至大肠杆菌 BL21(DE3+)中，IPTG 诱导表达 PvMSP1 重组蛋白，Ni 柱亲和层析纯化重组蛋白，快速液相蛋白层析分 离系统（FPLC）进一步纯化并检测其纯度，SDS电泳验证目的蛋白；（2） 用健康成人外周血分离单核细胞，在细胞因子 IL-4、GM-CSF 的作用下获得未成 熟 DC（immature DC, imDC）；（3）用不同剂量的 PvMSP1（1.0 μg/ml、10.0 μg/ml、 100.0 μg/ml）分别诱导 imDC 继续分化；（4）流式细胞术分析不同处理的 DC 表 面成熟性相关分子 CD83、CD86、HLA-DR 的变化；（5）ELISA 检测 DC 培养上 清中 IL-10、IL-12 的表达水平；（6）RT-PCR 检测 DC TLR4、TLR9 mRNA 的表 达水平；（7）MTT 法检测 DC 诱导自体淋巴细胞增殖的能力。 结果：（1）获得了 PvMSP1 重组蛋白，其蛋白纯度达 94%；（2）外周血单核细胞 能在 IL-4、GM-CSF 的诱导下分化为 imDC，细胞具有典型的 DC 特征性形态； LPS 能够诱导 DC 成熟，其表面成熟性分子 CD83、CD86、HLA-DR 的表达均增 加；（3）PvMSP1 对 DC 表型的影响：与未刺激组比较，PvMSP1 诱导组 CD83、 CD86、HLA-DR 的表达均明显增高（p0.01, p0.05, p0.05），但其不同剂量组 各表型的表达均无明显变化（p0.05）；（4）DC 细胞因子 IL-10、IL-12 的表达水 平：与未刺激组比较，LPS 诱导组 IL-10、IL-12 的表达量均明显增加（p0.01）， PvMSP1 诱导组 IL-10、IL-12 的表达量也均明显增加（p0.05，p0.01），但其不 同剂量组 IL-10、IL-12 的表达量均无明显变化（p0.05）；（5）DC TLR4、TLR9 mRNA 的表达水平：与未刺激组比较，PvMSP1 诱导组 DC TLR4 mRNA 的表达 均明显增加（p0.01），TLR9 mRNA 的表达均无明显变化（p0.05），但其不同剂 量组 TLR4、TLR9 mRNA 的表达也均无明显变化；与 PvMSP1 各剂量组比较， LPS 诱导组 TLR4 mRNA 的表达增加（p0.05），TLR9 mRNA 的表达无明显变化； （6）DC 对自体淋巴细胞增殖作用：与未刺激组比较， PvMSP1 诱导组 MTT 数 值均明显增加（p0.01），但其不同剂量组 MTT 数值均无明显变化（p0.05）。 结论：（1）PvMSP1 具有促进 DC 分化成熟的作用，且经其诱导成熟的 DC 具备 抗原递呈功能；（2）PvMSP1 可经 TLR4 通路而非 TLR9 通路诱导 DC 成熟。 关键词：间日疟原虫；PvMSP1；树突状细胞；分化；成熟；TLR； Effect of vaccine candidate PvMSP1 on differentiation, maturation and function of dendritic cells Abstract Objective: To investigate PvMSP1 (Plasmodium vivax merozoite surface protein1) on differentiation, maturation and function of dendritic cells (DC). To investigate the effects of PvMSP1 on the activation of DC via TLR (Toll Like Receptors ). Methods: (1) PET28a-PvMSP1 recombinant plasmid was transformed into E.coli host BL21(DE3+), IPTG was used to induce the recombinant protein PvMSP1, the purity of the recombi