间日疟原虫中国分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs25的基因多态性研究-免疫学专业论文.docxVIP

中文摘要蒋—～寓一 中文摘要 蒋—～寓一 ＼心疟疾是瘀原虫通过媒介昆虫蚊传播的人类最严熏的寄生原虫 感染缝疾病。每年，全整赛约有5亿入感染疟疾，遥200万人鑫萁 死亡，其中大部分为儿童及妊娠妇女。近年来，由于耐药性威株及 耐杀虫裁性蚊的著遗密瑰，使疟疾黪流行述一步恶纯，茨疼、撬疟 形势照为严峻。因此，开发有效的疟疾疫苗已成为尚今疟疾防治 工作遮切需要解决的课题。 疟疾疫苗研制的障碍主要在于瘀原虫复杂的生活史和广泛的 抗原变异性。因此，凌效的特异性疫萤候选抗原的确定已成为疫 苗研制开发的关键。传播阻断疫苗怒目前控制疟原呔传播的一种 重要战略措施。与红前期和红内期疫苗相比，传播阻断疫蕊的突 出特患在于它吴有露限豹抗原多态性霸较强的免痰原往。Pvs25 是间日疟原虫动合子表面表达的一种主要蛋白，对劫合子在蚊中 瑟孛戆存活与发育超着重要麓作用。该分子嚣蓠被认隽是研裁和 开发传播阻断疫苗首选的疫苗候选扰原。但在研究过程中也发现 Pvs25在基嚣承平上窍在羞一定熬多态性，不尾她蘧撩之瓣基透 多态性存在地理差异性。这种基因多态性的存在是否影响痰苗实 际应用的效果，目前尚不十分清楚。丽作为阕墨疟原虫广泛流行 的我灏来说，Pvs25基因多态性的基础研究目前尚未开展。 基于以上原因3本论文对我国闻嚣疟原虫单纯流行区湖爿艺、浙 江两省3l铡阉嚣疟源虫分离株的Pvs25全长基因进行了多态性 分析，同时与来自盂加拉的分离株进行比较，为间日疟原虫传播阻 断疫麓的研镧疆壶飘疆供必嚣的前掇依据。 材料与方法在疟疾感染流行季节，采集我国间日疟原虫单纯流行区湖北 材料与方法 在疟疾感染流行季节，采集我国间日疟原虫单纯流行区湖北 和浙江两省31例疟原虫镜检阳性患者血样，与Et本爱媛大学分子 寄生虫学教研室坪井敬文教授惠赠的14例盂加拉分离株一同，提 取寄生虫基因组DNA。以基因组DNA为模板，选取基因特异性 弓l物(Pvs25 primer sense：5’一CAC TrA GCC AAA ATG AAC TC一 3’；anti—sense：5 7一AAA GGA ChA GCA GG．A TGA TA一3’)。在 KOD—Plus聚合酶作用下通过聚合酶链式反应(PER)扩增Pvs25 基因的全长片段，所得PCR产物直接测序，计算机演绎法进行序 列分析(软件)。 实验结果 、、k1．本试验获得的Pvs25基因全长646Bp，编码215个氨基酸。 2．在核苷酸水平我们共发现3处点突变，并且均为错义突变 (G／C289，T／C389，C／A391)。在氨基酸水平，共发现三处氨基酸 替换(E／Q97，lfTl30，Q／K131)，其中Q／K131这一替换仅见于孟 加拉分离株。 3．核苷酸改变共产生4种基因型(G289一C389一C391，c289一 C3盼一C391，G289一C3盼一A391，C289一C3明一A391)。其中G289一C3∞一 C”1是一个新发现的基因型，仅见于中国分离株，并且为中国分离 株的主导基因型。 4．核苷酸多态性竹值显示，45例疟原虫分离株核苷酸多态 性叮r值为0．00117株；中国分离株霄值为0．00050；孟加拉分离株 百值为0．00133；在中国流行区内部，浙江分离株霄值为0．00024， 湖北分离株盯值为0．00066。这些结果提示Pvs25基因在不同地 ·2· 理撩麓漤霸、浙江、鬣擞控三处笼较)葳鬻～缝蠛攀漆努鬻袜之 理撩麓漤霸、浙江、鬣擞控三处笼较)葳鬻～缝蠛攀漆努鬻袜之 阕蒸舞多恣煞卡癸凌隈，各滚卷区天爨萋缝嫠异。 键 谂 岑研究首次对我辫闽基瘀踩虫单缝流钴隧分鬻糖{僚矮黻麟痰 蓄囊i囊魏漂t麓,s25簿蕊嚣多蕊往褥煮避行擐遘。实骏鳍聚豢示， Pvs25攥躐崔不阏地理株间(湖北、浙波、孟加拽三处比较)或丽一 缝壤幂N努鸯狳志窝蕊N多泰洼÷努凑蔽，在各滤符莲蟊嚣藩羧 差异，进～步溅实了Pvs25撼闷日癞源虫传瓣阻断痰苗理想的候 选稳簸。 传播阻断痰筐魁因前控制疟原威感染J}臼一种黧搂战略措施。 窀激蚊滁莰塞簿将凳豢这戆裘匿蛋鑫撵蠹撬瓣受痰天津，燮之产 生抗救输段虫体表磷戳自酌特异性抗体。蚁吸入被恕疫的人血 震，技辫蠹发育戆蛊搭鸯大舔惑产生黪撬搭发生撬簇撬倭菠纛，簸 丽隧耩疟藤鸯凝蚊簿辩游发霄。与燕它两释瘩疾痰黼黎#致翦嬲和 红巍飙亵藏籀魄，传攫黻酝痰骛簿甓熬特熹谯予撬艨嶷异乡，遮一 发溅对辫痍疫薅瓣瓣粼簸舞藏葵青熏簧的寒义。众瓣震辩，疟痰 疫萤骥镪懿耋要障磷寝予疟溅基复杂的生滋熙秘广澄的抗愿蜜异 整。嚣魏，黎逸撬藤葵藏毒慕拣蘸变簿缝这一德熹蕊终撩惑叛痰 蓊将舆京广阔的发展旃景。蒋播阻断疫蕾与黧德阶黢疫菌或抗疟 鹫麴联合嶷臻霹麓会藏海骑褰、撬疼憋主导搀德。 Pvs25是褥瓣疟藤淼蚊袭帮阶畿含子和潞台予滏黼特弊性表 达戆纛耱圭