姜油树脂通过Nrf2通路介导的辐射防护作用.PDF

第33 卷 第4 期 辐射研究与辐射工艺学报 J. Radiat. Res. Radiat. Process. Vol.33, No.4 2015 年8 月 /fushe/CN/volumn/home.shtml August 2015 姜油树脂通过 Nrf2 通路介导的辐射防护作用 李 晴 徐 畅 王 彦 杜利清 王 芹 王 璐 刘 强 （北京协和医学院中国医学科学院放射医学研究所 天津 300192 ） 摘要 采用MTT(Methyl thiazolyl tetrazolium)实验检测姜油树脂对间充质干细胞的细胞毒性；流式细胞术检测 细胞中活性氧(ROS) 的变化；彗星实验检测细胞 DNA 受损情况；实时荧光定量 PCR(RT-PCR) 以及 Western Blot 检测核因子E2 相关因子2 (Nuclear factor-E2-related factor 2, Nrf2)及其下游典型的抗氧化基因（如HO1 、 NQO1 ）的表达变化。结果表明，姜油树脂能降低辐射所诱发的活性氧水平，能减少辐射所造成的 DNA 损 伤，并能明显提高发挥辐射防护作用的抗氧化酶、脱毒酶的mRNA 及蛋白表达水平。提示姜油树脂可以通过 降低辐射诱发的氧化损伤发挥辐射防护作用，其作用机制与Nrf2 有关。 关键词 姜油树脂，间充质干细胞，核因子E2 相关因子2(Nrf2) ，辐射防护 中图分类号 TL71 DOI: 10.11889/j.1000-3436.2015.rrj.33.040201 电离辐射可直接引起DNA 单双链断裂和染色 有效的辐射防护药物提供实验依据。 体损伤，间接使细胞产生过多的活性氧 (Reactiveoxygen spices, ROS)，进而引起细胞衰老和 1 材料与方法 死亡等细胞损伤[1] 。核因子E2 相关因子2 (Nuclear 1.1 试剂与材料 factor-E2-related factor 2, Nrf2)是调控细胞氧化应激 的核心转录因子[2] ，在电离辐射引起的氧化应激反 ROS 检测试剂盒、MTT （上海碧云天生物技术 应中起到非常重要的作用[3-4]，Nrf2 活化进而与抗氧 有限公司），Trizol 试剂（美国Invitrogen 公司），逆 转录试剂盒（日本TaKaRa 公司），FastStart Universal 化反应元件(Antioxidant response element, ARE)这 种顺式作用元件结合增强，最终增强一系列抗氧化 SYBR Green Master(Rox) （瑞士Roche 公司）。Nrf2 抗体、HO1 抗体、NQO1 抗体（美国Abcam 公司）， 酶及II 相解毒酶的表达，包括血红素加氧酶(Heme oxygenase-1, HO1)、还原型辅酶Ⅰ醌类氧化还原酶 β-tublin、兔抗、鼠抗（武汉博士德公司）。 [NAD(P)H: quinone oxidoreductase 1, NQO1]等，诱 1.2 细胞培养与照射 导抗氧化系统的表达升高，降低细胞内的活性氧水 平，成为电离辐射自由基清除的有效通路[5-6] 。 间充质干细胞(MSCs) 由国家工程研究中心赠 送，用含 10%胎牛血清（美国 Gibco 公司）的 姜油树脂是从姜科植物中以CO2 超临界萃取法 DMEM-F12 于37 ℃、5% CO 饱和湿度恒温培养箱 提取出来的一种酚类混合物，含有多种酚类和酯类 2