降钙素基因相关肽对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响-药理学专业论文.docxVIP

中文摘要目 中文摘要 目 的 降钙素基因相关肽(calcitonin gene—related peptide，CGRP) 由降钙素Cal／CGRP基因表达，是具有强大的扩张血管作用的含 37个氨基酸的生物活性多肽。目前，虽已有CGRP能促进正常动 物血管内皮细胞、抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的报道，但关 于CGRP对糖尿病动物VSMC增殖的影响尚未见报道。为明确 CGRP在糖尿病血管并发症中的作用，本文研究了不同浓度CGRP 对培养的糖尿病大鼠和正常大鼠VSMC的增殖和细胞周期的作 用。VSMC的钾通道主要为ATP敏感性钾通道(K。。)。CGRP对 血管的作用与Km通道密切相关，可以通过cAMP—PKA通路激 活钾通道。因此，本实验也观察了K椰通道开放药吡那地尔和 K。开通道阻断药格列本脲对CGRP对VSMC增殖作用的影响。 、＼L实验方法 8周龄体重范围200～2509的雄性Wistar大鼠，测空腹血糖 后按体重均衡的原则随机分为糖尿病组和对照组，糖尿病组大鼠 按每只65 mg／kg腹腔注射链佐霉素(streptozotoein，STZ)，对照组 大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸溶液。饲养三天后，分别测量体重 并从尾尖部采血测定其空腹血糖，血糖值≥10mmol／L者为糖尿病 模型成功大鼠。低于10 mmol／L的糖尿病组大鼠被淘汰。取喂养 四周的糖尿病和对照组大鼠，测空腹血糖后，按经典的组织贴块法 进行细胞培养。本实验所用细胞为生长良好的第三代细胞。在酶 标仪上，检测不同浓度的CGRP(1～100nM)对培养不同时间的 VSMC的影响以及格列本脲(10’5 mol／1)和吡那地尔(10。mol／1) 对CGRP俸篪的影响。撺镪率用如下公式表承：搀制率％= 对CGRP俸篪的影响。撺镪率用如下公式表承：搀制率％= (OD对照一OD实验)／0D删×100％。在流式细胞仪上梭测CGRP及 啦那缝尔(10一mo扩1)对细臆周期的影响，每个样本梭测10000个． 细脆。所得数据用受土s裘示，缀闻比较熙t检验，多缀闻比较用 单霞寨方差分析。PO。05认势具燕显著性差箕。 实验结采 4周STZ糖尿瘸大委i|【空骏盘糖哽显裔乎对照缝，体重则嚷显 低予同栽的对照缌。细胞培养结果曼汞，辕躁病太鼠VSMC和对 照组太露I VSMC呈魏相似的生长方式，光镜下其形态采觅髓燕差 别，均呈长梭形、放射状生长。但是在相同的接种密度下，糖舔瘸 太鼠VSMC垒长酶更快，袭瑷为光密度值醑显犬予对照纽。不臻 浓度的CGRP(1—100nmol／1)对VSMC的增臻墨时闰和浓度农赖 性揶锱作带。 K。TP遗道阻断药格列本骤(10”moVl)郝分阻断CGRP对培 养韵糖尿瘸组VSMC的撬增殖终用，使CGRP对VSMC的抑制率 由49．3±1．2％减少到35．6士1。l％(P0．01)，僵对对照缱 CGRP的摭增殖作霸无唠显影响。K脚通道开放药吡鄂地黎(10。 mol／1)对CGRP对对照组VSMC的抗增殖作用茏明显影响，但可 以增强糖尿瘸缀CGRP的抗增殖律咫，使CGRP对VSMC的抑铡 率由49．3±1，2％增加到58．3±3。9％。CGRP(10～moL／L)可使停 留予‰／G，期缨胞增多，藤进入S和G2／M期的细胞数鞫减少。 袁盟CGRP阻止VSMC由Gb／G；期向S期转换，获丽摔锚其增蹙。 Pinac浊l(10“mol／L)可增强CGRP对糖尿病太鼠VSMC抗增殖作 用(P0。05)，但对正常缎CGRP的作埒元影噙。 ·2· 结 结 论 1．CGRP对糖尿病大鼠VSMC具有显著的抗增殖作用，使处 于Go／Gt期细胞增多，s期和G2／M期细胞减少。 2．CGRP对糖尿病太鼠VSMC的抗增殖作用可能与其通过开 放K栅通道有一定关系。， ^ 殖糕讯∞毗雠繇漕腩炳洫鲆哕胞9增殖 ／ 。 ·3· Effect Effect of calcitonin gene—related peptide on proliferation of vascular smooth muscle cells of diabetic rat ABSTRACT Objective Calcitonin gene—related peptide(C臼啦)is a neuropeptide with potent vasodilator effect．Although there are reports about CGRP call promote normal endo出elium cell but inhibit VSMC proliferation．there is no report about the effect of CGRP on the proliferation of