胶原蛋白止血海绵的研制-高分子化学与物理专业论文.docxVIP

Classified Index: TB324 U.D.C: 620 Dissertation for the Master Degree in Science DEVELOPMENT OF COLLAGEN HEMOSTATIC SPONGE Candidate： Ye Zhenming Supervisor： Associate Prof. Jinmei He Academic Degree Applied for： Master Degree of Science Speciality： Polymer Chemistry Physics Affiliation： School of Chemical Engineering Technology Date of Defence： July, 2013 Degree-Conferring-Institution： Harbin Institute of Technology 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 - - I - 摘 要 胶原蛋白或称胶原是动物体内含量最丰富的蛋白质，在动物体内起支持、保 护、连接等多种作用。目前,胶原已广泛应用于医学医药工业、食品工业、日用化 学品工业、生物合成及胶原修饰等领域。 本文以牛腱（T）为原料，利用无花果酶（F）和胃蛋白酶（P）提取胶原，重 点研究胶原的提取及提纯工艺，实验表明，当提取实验的温度为 4℃，物料比分别 达到 F:T=1:25 和 P:T=1:10 时，胶原的提取效果最好，产率可达到 77%左右。采用 精过滤、高速离心、盐析及透析等工艺对胶原进行提纯，发现精过滤的效果略好 于高速离心，盐析的最佳工艺为：氯化钠浓度 3mol/L，盐析时间为 36 小时，透析 的最佳时间应不少于 7 天。通过红外光谱，紫外光谱及氨基酸自动分析仪将所提 取的蛋白质定性为胶原；通过 SDS凝胶电泳测试出所提取的胶原蛋白分子 量大于 300kDa，且纯度较高；通过透射电子显微镜观察到了胶原在溶液中的纤维 状形态。 选择戊二醛为交联剂交联胶原，制备胶原蛋白海绵，通过红外光谱发现所使 用的交联剂浓度并没有破坏胶原分子结构，使胶原发生变性；DSC、TG 测试表明 胶原材料的热收缩温度和分解温度分别上升了 13℃和 11℃；扫描电镜测试表明经 过戊二醛交联后海绵的微孔结构逐渐减少，结构趋于更加规整和致密；测试交联 海绵的物理性质发现，交联导致胶原的吸水率及孔隙率下降，对溶出液的 pH 值影 响不大。通过改变海绵制备过程中的溶液酸度、预冻温度、胶原浓度及预冻时间， 研究以上参数对胶原海绵微观结构的影响，结果表明，预冻温度及胶原溶液的酸 度是影响海绵微观结构的关键因素。选择微观形貌较好的胶原海绵进行动物实验， 通过兔耳动脉创伤模型及兔肝脏创伤模型评价其止血性能，发现未交联的胶原海 绵止血效果较好，对于兔耳动脉的平均止血时间为 148s，出血量为 0.77g，对于兔 肝脏创伤模型的平均止血时间为 202s，出血量为 1.72g，止血性能基本接近于标准 医用胶原蛋白海绵并略好于标准品，经过戊二醛交联后的胶原海绵止血性能出现 一定程度的下降。 关键词：胶原；提取及纯化工艺；交联；微观结构；止血 - - II - Abstract Collagen is the most abundant protein in animal body, playing support, protection and connection roles. At present, collagen has been widely used in medicine industry, pharmaceutical industry, food industry, daily chemical industry, collagen biosynthesis and modification industry. In this paper, the ficin and pepsin were used to extract collagen from the bovine tendon in order to study on extraction and purification process of collagen. Experimental results showed that when the temperature of the extraction experiment at 4 ℃, the optimum proportion of ficin and bovine tendon was 1:25, and for pepsin,