胶原和基质金属蛋白酶在血管成形术后再狭窄中的表达和意义实验研究-影像医学专业论文.docxVIP

天津医科大学博士学位论文胶原和基质金属蛋白酶在血管成形术后再狭窄中的 天津医科大学博士学位论文 胶原和基质金属蛋白酶在血管成形术后再狭窄中的 表达和意义实验研究 专业：影像医学 研究生：葛夕洪 导师：贺能树 教授 摘 要 目的①评价大鼠颈动脉再狭窄模型内膜增生和重塑对再狭窄的作用。②观 察PTA后胶原含量在血管壁各层随时间的演变规律，观测其超微结构改变， 探讨胶原在血管再狭窄过程中的表达及意义。③观察PTA后MMP一2、MMP一9、 TIMP一1在血管壁各层的分布及动态变化特点，分析其与胶原变化、血管VSMC 增殖之间的关系，探讨MMPs在血管再狭窄过程中的变化及作用。 材料和方法 I、动物模型和分组SD雄性大鼠48只，实验侧颈总动脉改趋导丝法制 作再狭窄模型，对侧假手术颈总动脉为对照组，每组取动脉损伤后l天、3 天、7天、14天、28天和42天6个观察时间点，每个时间点8只大鼠。根 据HE染色标本，实验侧选血管结构保留完整、内膜增生较满意的30只动物 标本，保证各时间点有5只动物，对照侧随机选取5只动物标本作对照进行 后续各种染色及处理。 2、病理学检查所有标本行HE染色，对胶原纤维进行Maggon三色染色 法和Van Gieson染色法两种方法进行染色，对PCNA、Ⅱ一Smooth—Actin、 MMP一2、TIMP-l进行免疫组织化学染色，MMP一9进行免疫组织化学和原位杂交 两种染色。选取对照组、7、14、28、42天中标本各两块进行电镜检测，观 察胶原的超微结构动态变化。 3、病理学资料的图像分析采用病理图像分析系统对标本HE染片进行 形态计量分析。分析胶原面积占分析面积的百分比作为胶原密度，以胶原积 分光密度和胶原面积比值为胶原平均光密度，以此2指标衡量胶原随时间的 动态变化。分别计数PCNA、删P一2、MMP-9、TIMP-I免疫组化染片和MMP一9 1 天津医科大学博士学位论文原位杂交染片内膜、中膜、外膜阳性细胞率衡量各自的表达。 天津医科大学博士学位论文 原位杂交染片内膜、中膜、外膜阳性细胞率衡量各自的表达。 结果 一、内膜增生和重塑与血管再狭窄的关系 l、动脉损伤后1天、3天，中膜见损伤改变，厚度及面积略小，外膜增 生，厚度及面积增加，中膜、外膜细胞发生表型转换，PCNA表达达高峰。第 7天，内膜开始形成，PCNA表达达高峰，Q-Smooth-Actin在外膜一过性表达； 中膜面积、厚度基本恢复正常，外膜面积、厚度达高峰，中膜、外膜PCNA 表达逐渐下降。第14天，内膜增厚，管腔狭窄，ECM增多，PCNA表达进一步 下降，o—Smooth～Actin表达增多。第28、42天，内膜明显增厚并基本稳定， 管腔明显狭窄，外膜厚度、面积恢复正常，中膜萎缩，细胞表型恢复收缩型， 内皮细胞覆盖管腔。 2、再狭窄过程中，管腔丢失面积大于内膜面积，在第7、14、28、42 天，内膜面积分别占管腔丢失面积的51．12％、65．2l％、77．86％、75．02％， 平均67．30％。外弹力板围绕面积也明显下降，在第7、14、28、42天分别 占管腔丢失面积25．54％、20．24％、20．56％、22．42％，平均22．19％。 3、管腔丢失面积、内膜面积及外弹力板面积三者间有明显相关性，三 者之间建立了多元回归方程Y=34．973+O．877 xl+1．450 X。(Y为管腔丢失面 积，X。为内膜面积，x。为外弹力板减少面积，x。，x：均PO．001)，经标准化后， 其标准化系数分别为0．624、0．496。 4、管腔面积丢失率、内膜面积增长率及外弹力板面积缩小率三者间有 明显相关性，三者之间建立了多元回归方程Y=1．281+0．867X。+1．764X：(Y 为管腔面积丢失率，x．为狭窄率，池为外弹力板面积缩小率，X。、X2均PO．001)， 经标准化后，其标准化系数分别为0．626、0．492。 二、胶原在血管再狭窄中的表达及意义 1、本组Masson染色显示，胶原在正常血管主要集中在外膜，占外膜单 位体积的49，3l％，中膜胶原含量较少，占中膜单位体积的20．38％。 2、内膜的胶原从第7天内膜开始出现即开始表达，随内膜体积增大， 胶原含量明显增加，第28天基本稳定。中膜胶原含量在整个过程中平均值略 有起伏，但各组间无统计学差异。外膜胶原PTA后开始逐步增加，到第7天 2 天津医科大学博士学位论文达高峰，以后均值逐渐下降，虽与第7天无明显差异，但仍高于正常。 天津医科大学博士学位论文 达高峰，以后均值逐渐下降，虽与第7天无明显差异，但仍高于正常。 3、内膜、外膜胶原密度分别与内膜、外膜面积有相关性，而中膜胶原 密度与中膜面积无相关性。内膜、中膜、外膜胶原密度都与管腔面积丢失率 具有明显的相关性。中膜、外膜胶原密度与外