胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞对脊髓运动神经元的营养保护作用-外科学(手外科)专业论文.docxVIP

兰生型垫尘堂旦堕些堂畦堕旦塑塑!堕堕———』生蔓篓照!!兰胶质纲胞源性神经营养因子基因修饰的神 兰生型垫尘堂旦堕些堂畦堕旦塑塑!堕堕———』生蔓篓照!!兰 胶质纲胞源性神经营养因子基因修饰的神 经干细胞对脊髓运动神缀元的营养保护作用 华中科技大学同济医学院附属协稀医院手外科 博士研究生：．李 进 导 师： 洪光祥 教授 鄹 稿 周茸神经损伤是一种l临床常见病，尽管外科修复技术有眭足的 避步，包括显徽外科技术的应用、神经羚膜或衷骥无张力缝合等， 但治疗效果并不理想，尤其是臂从神燎撕脱伤。臂从神经根性撕脱 伤可铎致运动神经茏的弱亡，薅叁钵神经组绞藩生齄力差，返葶孛挣 经元的丢失几乎无法弥补；再生神经轴突生长缓慢，有效再生率低； 靶觏岗长期失神经状森g；起萎维，严蘸的瓢肉萎壤可蘧交为纤维性 组织，使功能无法恢复。这些问题，尤其是运动神经元的死亡，严 重限制弹经修复携效果，藤圈徉或类似的闻碰也出现在脊髓损伤、 颅脑外伤、遗传性／代谢性神经元病等疾患中。在医学技术商速发 展豹二十一越缝，神经系统癃犊仍然燕临床上疆严重的拂战之一。 神经营养鞠-子(ncuro[rophic factor，NTFs)鲴具有阻止神经元凋 亡，维持神经冗的存灞；促进粹经轴突荐尘；防止靶器官萎缡两逐 渐被认为是最有潜力的治疗药物之一。在多种已知的神经营养因子 中，胶质细胞源性的生长因子(glial line-derived 望主型垫尘堂旦塑照堂堕堕昼堡型竖堕 望主型垫尘堂旦塑照堂堕堕昼堡型竖堕 擅主堂生!!!蔓 factor，GDNF)捌J神经元的保护作翊最强大，尽管它鼹秘是困对 多巴胺麓神经元镁大豹傈护终蹋露毅发臻。在对纛密度褰钵培养疆 胎运动神经元的存活作用中，GDNF的50％有效浓度(EC50)仅为0．2 ±O．1pg／ml，是BDNF的1／75，是CNTF的1／650，是囱细胞抑制因 子(LIF)的1／2500。而且它还是唯一既能阻止运动神缀元死亡，又 能防止其瑰体萎缨浆毒枣经营养因予。：i驻年来更是发现它熊促进神经 腿肉连接嚣澎袋鞠踅建，促进运韵终投形成；影嚷耪缀元，茏其是 神经肌肉连接的电生理活动，改善神经肌突触的电生理状态；抑制 运动神经元胞体内一氧化氮合成酶活性，增加胆碱乙酰簇转移酶活 性，改善运动神缀元的功能状态。因此，GDNF在治疗外周神经损 伤、脊夔损伤、运动享枣经元薅等疾您中骞广耀豹应援露袋。 目前簸床上缺乏安全、有效的棒经营养因子绘药途径。全身绘 药剂量大，．可能出现厌食、消瘦等并发症；局部给药往往需要多次 注射，繁琐且痛游；用生物可吸收材料作载体，局部或多或少都有 炎性细胞浸润，并缺乏有效的可控缓释技术；即使是皮下微象给药 叛螽餐罴取窭。溅越寻援一秘台逶戆绘骜途径残燕一个遮甥懿课题。 基因治疗鼹暇十年来的热点研究方向之一，它给临床上很多疑 难病症如肿瘤、家族性遗传病、自身免疫性疾病等带来新视角、新 思路、新希望。外周神经损伤不光会引起神经元胞体、轴突、树突 的损伤，引起屈氏体、线粒体豹超微结构的损伤，还会弓|起神经元 孩凌基因壤态懿敬炎。菜些基因被激溪，勇一些基嚣粼投荚}ll，这 些基因状态的改变gf起胞内多种蛋囱质分子的改交，继而学致下一 步的修复反应或凋亡反应。所以说很W能就是这些基因状态的改变 决定了细胞是存满还是死亡。用基豳治疗的策略将有保护作用的基 嚣导入髂内，後篡在髂内长期表达密游经熬蛋自，或改变季孛经元豹 菜些萋因装态来发箨治疗作霜，有勰褥蠲豳褥经旗伤的滚疗效粟提 高到一个新的水平。 兰主型垫查堂旦鎏鳖堂堕堕垦堕量!竖堕 兰主型垫查堂旦鎏鳖堂堕堕垦堕量!竖堕 堕主堂垡!塑生 基因治疗的策略常见的有两种：1、将重组质粒／病毒直接注射 到靶组织目前研究已证明当重组病毒／质粒注射到神经断端，被转 染的受体细胞表达的目的蛋白质分子可以被轴突逆转运到中枢，甚 至有报道重组病毒本身也被转运到中枢，发挥进一步的治疗作用。 2、将重组质粒／病毒在体外转染靶细胞后，再将基因修饰的靶细胞 放入体内，即ex Vivo策略。这种能够分泌有治疗作用因子的工程细 胞可以植入到中枢、神经断端、受损神经支配的靶组织，发挥治疗 作用。另外还有反义RNA、核酶等基因治疗方法。其中ex Vivo策 略以其效果稳定，效率高而备受青睐。在ex Vivo策略中最关键的工 具有两个，即载体和细胞，这两个工具的性能直接影响到治疗的效 果。 目前基因治疗仍存在很多问题，例如安全性、能否长期表达、 对异体蛋白的排斥反应等等。而目前细胞基因水平、蛋白质水平未 知领域太多也使基因治疗充满风险性和探索性。目前在体基因治疗 产生的目的蛋白质在局部浓度往往难以达到lug／ml这个数量