拮抗链霉菌Men-myco-93-63分类学鉴定及其几丁质酶基因研究-植物病理学专业论文.docx

摘要一————————————-——_—_——-_——h，—————————————h———_—————～———_’——————，_——————～ 摘要 一————————————-——_—_——-_——h，—————————————h———_—————～———_’——————，_——————～ 拮抗链霉菌Men—myco一93-63分类学鉴定 及其几丁质酶基因研究 摘要 形态特征、培养特征及生理生化特征分析发现，棉花黄萎病拮抗链霉菌 Men—myco-93-63孢子丝呈螺旋形，孢子椭圆形，孢予表面结构光滑。在九种不同 培养基生长良好，其基生菌丝及气生菌丝颜色分别为淡黄色和淡白色，在部分培养 基上培养可产生象牙黄或豆汁黄可溶性色素。链霉菌Men．myeo-93．63可在15。C～37 ℃环境下生长，环境温度为45C时生长停滞。其存活pH值为pH5呻H12；明胶液 化；牛奶凝固；淀粉水解强，可利用纤维素；不产生H2S和黑色素，不还原硝酸盐： 利用葡萄糖、麦芽糖、甘油、木糖、果糖、蔗糖、肌醇、阿拉伯糖、鼠李糖，不利 用棉子糖、甘露醇、醋酸钠。 链霉菌Men-myeo一93—63与玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)的形态特 征及培养特征一致。=者的16S rDNA序列相似性达到了99．93％。并且二者的16S rDNA序列中的120bp Y可变区序列完全相同。因此，根据链霉菌多相分类原则， 将链霉菌Men-myco一93—63定名为玫瑰黄链霉菌Men-myco-93—63(Streptomyces roseoflavus Men-myco一93-63)。 从GeneBank检索到39个克隆自链霉菌的几丁质酶基因，利用Clustalv程序 对其进行基因多序列排列，根据相似性大致分成3群，并根据B群和C群基因序 列的保守区域设计PCR引物，对河北农业大学植物病害生物防治研究室筛选并保 存的5株对棉花黄萎病菌具有抑制作用的链霉菌进行了分子探测，发现这5株链霉 菌普遍存在第19族几丁质酶基因和与Streptomyces lividans chiC相似的第18族几 r质酶基因。Streptomyces roseoflavusMen-myco-93—63的PCR扩增产物分别命名为 chi 19-I和chiC。序列分析表明，它们分别与StreptomycesgriseusHUT6037chiC(属 第19族几丁质酶)和Streptomyces lividans chiC(属第18族几丁质酶)的催化域序 列高度同源，前者为85．42％，后者为92．02％。 以大肠杆菌．链霉菌穿梭柯斯质粒pKC505为克隆载体，构建了玫瑰黄链霉菌 Men-myco一93—63在大肠杆菌LE392的基因文库。3168个转化子构成的文库覆盖率 达到了99．93％，插入外源DNA片段大小为20~30kb。利用chiC基因片段为探针， 从基因文库筛选到5个阳性克隆。表明所构建的基因文库比较完整，可以用于玫瑰 摘要黄链霉菌Men-myco-93—633抗生素生物合成基因的克隆。 摘要 黄链霉菌Men-myco-93—633抗生素生物合成基因的克隆。 利用染色体步移法测定了Streptomyces roseoflavus chiC基因1179bp片段序列， 该序列包含了典型的第18族几丁质酶基因的活性位点序列(Prosite数据库，编号： PS01095)，并且包含了与蛋白质结构域数据库(Pfam)中第18族糖基水解酶(编 号：PF00704)基因相似的完整序列。表明该片段包含了Streptomyces roseoflavus chiC 的整个催化域序列，该序列编码354个氨基酸残基，与Streptomycescoelicolorch∞ 催化域在核苷酸水平的的同源性为82．8％，在氨基酸水平的同源性为83．3％。 关键词：玫瑰黄链霉菌Men-myco-93—63；分类鉴定；几丁质酶基因；基因克隆 cosmid基因文库 Taxonomic Taxonomic Identification ofa Biocontrol Agent Streptomyces sp．Men—myco-93—63 against Verticillium dahliae and Characterization of Its Chitinase Genes Abstract LrU Zhanliang Streptomyces sp．Men-myco-93—63，with screwy aerial hyphae and oval spore， grows well irl nine different media and produces ivory,yell